补充!
如果不是阳性结果的话,我能听到您的建议吗?
下面是一些详细的资料
各位老师:
小学生科研有一块是做冰冻免疫组化的,做的不成功!最最重要的是,我不知道自己做的有没有阳性结果!如果有老师懂这一块的话,希望能得到您的指点!
实验动物是鸡,目的蛋白是T淋巴细胞细胞膜上的一类跨膜转载糖蛋白——CD4。
我的实验材料:新鲜组织,液氮速冻(既有直接扔里面的,也有用锡纸做纸盒漂上面的),—80°保存至少72小时,然后切片。所用切片机是浙江益迪产的YD-1900冰冻切片机。一抗购自美国SBA鼠抗鸡CD4单抗,二抗是购自中山金桥的SP9002二抗试剂盒。
我的试验方法:切片5微米,然后室温放置30min以上,—20°丙酮固定20min,然后再室温放置30min以上,—20°保存。然后常规免疫组化:pbs 3×5min,3%双氧水20min,pbs 3×5min,二抗的A液(也就是山羊血清封闭)37°×30min,甩去,加一抗(pbs,1:100稀释)4°过夜,pbs 3×5min,j加B液(羊抗鼠的二抗),pbs 3×5min,加C液(也就是辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素),pbs 3×5min,DAB显色