免疫组化查找原因，多谢
我刚开始做免疫组化，一直没有结果，后来观察是在脱水透明封片前还有点，但封片后观察就没了。详细情况如下，多谢
我做的结肠福尔马林固定，蜡块包埋组织，抗原是膜抗原，查阅资料文献，在结肠腺上皮应该表达，抗体也检测没问题。抗原修复按说明书EDTA（说明书是PH9.0，买的是8.0的就凑合着用的。微波煮沸后加入玻片低火9分钟，自然冷却），一抗浓度说明书1：250，也试过1：100，效果没变化。DAB从几分钟到30分钟都试过。苏木素几秒钟，没用盐酸分化。DAB的时候观察可见到被染上色的另一个细胞层，复染后观察，可见到核蓝色，腺上皮细胞膜网格状，颜色不是很深，土**吧，比**深点，但还不是褐色。但是脱水封片后（中性树胶），细胞膜就也变成蓝色的了，背景不深，结构还算比较清楚。我也很奇怪，我连个非特异染色都没有，大体就是这样，不知道说明白了吗，做过几次了，一直没有阳性结果，愁死了。恳请帮助，谢谢
