九日

1. 2 方法
切取1. 5～3 毫米厚的组织块进入如下流程:1. 2. 1 AAF 氏固定液固定兼脱水1 缸, 1h , (约相当于80 %乙醇脱水) 。
1. 2. 2 90 %乙醇脱水1 缸,1h。
1. 2. 3 95 %乙醇脱水1 缸, 1 至数h(可根据此来调节和安排包埋的时间) 。
1. 2. 4 无水乙醇脱水2 缸,每缸1h。
1. 2. 5 正丁醇脱水兼透明2 缸,每缸约2h。
1. 2. 6 60～63 ℃温箱中用硬脂酸—石蜡液透明兼浸蜡1 缸,1h。
1. 2. 7 60～63 ℃温箱中用石蜡浸蜡二缸, 每缸1h。
1. 2. 8 石蜡包埋、冷冻台冷冻,切片2～4μ。
1. 2. 9 60～63 ℃温箱中烤片20min 至1h , HE 染色、观察。
2 讨论与体会
硬脂酸加热后既可溶于无水乙醇、正丁醇和脂质,又可以溶于石蜡,是较佳的透明质。有时为了赢得时间, 正丁醇的透明可省去, 无水乙醇脱水后直接移入硬脂酸—石蜡中透明兼浸蜡, 其结果差别不是很大(除非要加快流程, 否则不要省去此步) , 只有当组织固定不好的时候有轻微的组织收缩现象。但无论如何, 需要在漂片的温水(43～45 ℃) 中加入适量明胶溶解(明胶用量为:1000ml 温水, 约0. 5～1 克, 以染色时既能粘住组织, 又不至于出现浅蓝色背景为准) , 以粘住载玻片上的组织防止脱片。冷冻台上冷冻过的组织蜡块, 在进行切片时,可用口吹上少量热气, 稍稍软化组织蜡块表面,即可切出较平整的切片, 在漂片温水中基本不用展开, 就可以平整地捞到载玻片上。但冷冻台温
度不能太低, 可在冷冻台表面加一块有机玻璃隔开蜡块进行冷却15～30min , 防止组织蜡块冻裂而影响切制切片。正丁醇作透明实验时, 1～1. 5h 已能达到较理想透明的效果, 即使是在60～70 ℃之间, 也不会像无水乙醇和二甲苯那样, 引起组织收缩。可因冬夏季气温的影响,来调节和来改变透明时间。切制出较薄的切片后, 建议使用2 倍浓Carazzi氏苏木素染液和“改进混合伊红染液”[3 ] 来染色,可以染出清晰的细胞核和层次分明的组织结构。
此文转载节选于《大理学院学报》2003年第2卷第3期
作者：陈海滨,董从丽,潘云(大理学院基础医学部,云南大理671000)

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