zhba0918

我做的大鼠睾丸的冷冻切片HE染色,但是细胞核不能着色显蓝是什么原因?
下面是我的染色参数,望各位大师指点不足!
   
     (8）蒸馏水                                          片刻
    （9）苏木素液染核                                    10—15分钟
    （10）自来水洗                                       片刻
    （11）1%盐酸酒精分化                                0.5—1分钟
    （12）流水冲洗                                       片刻至数小时
    （13）碳酸锂饱和水溶液反蓝                           1分钟
    （14）流水冲洗                                       15分钟至数小时
    （15）复染 0．5％伊红水溶液（对比染色）              2—5分钟
    （16）自来水洗（分化伊红）                            片刻

folksmile

老兄，你碳酸锂饱和水溶液反蓝后是蓝的吗？

ls168520

（10）自来水洗                                       片刻
片刻是什么概念？要知道自来水洗 的目的是把多余的苏木素洗掉就行了，要是洗的时间长的话都蓝化了，在分化以后蓝化还能蓝吗？

zhba0918

我就是不分化，直接反蓝，还是不会出现蓝色。是不是我得染色液有问题？还是我固定剂有问题（4％多聚甲醛）？

g_xaxia

HE染色，伊红染后，还需要用水冲洗吗？？？
我们是直接转到95％乙醇中

xhw2tl

1%盐酸酒精分化时间有一些长，是不是5--6秒就可以了？

一般最好进去马上就出来，直接水洗

dingwei

分化只是要将细胞浆内苏木素染料和核上过深的苏木素染料去除。
苏木素染好后核是红棕色。碰到酸后也是红棕色。
蓝化是将核上苏木素红棕色的颜色变成蓝色。
分化与不分化的苏木素都要蓝化。
蓝化以后还可以再分化。分化的时间长短应镜下观察，就是显微镜下控制苏木素的深浅，可以反复多次重复分化过程。
如果不会蓝化，主要是苏木素不能用了。也有的是固定液PH值的原因。还有固定不好脱水不好也会使细胞发灰。

hakase

估计是你的苏木素染液配得不好，我的配方染出来的张张清楚，而且苏木素最多染5分钟，自来水洗去多余染液后，流水冲洗10分钟，再用伊红染2分钟，流水洗去附着的染液，然后脱水就成了，从来没有失败过。有时还嫌苏木素染得深了呢。
从来没用过碳酸锂饱和水溶液反蓝，也没用过盐酸呵。