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脱钙

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请问各位老师,哪种脱钙液效果最好?如果10%硝酸不加尿素对效果影响大不大?

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我们用的脱钙液也是10%硝酸,没有加尿素,对效果无多大影响。

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硝酸脱钙效果最不好。虽然脱钙速度快,但对细胞的损伤最大(容易脱过头)很不容易掌握。用硝酸脱钙过得HE片子,苏木素染色一般都变淡和偏红。
盐酸,甲酸混合脱钙液比较好。单用甲酸也可以,但脱钙能力弱些。
EDTA脱钙对细胞的损伤最小,多用于免疫组化。

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五当量盐:40ML盐酸,960ML水.

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[这个贴子最后由ylzhao在 2005/01/30 10:11am 编辑]

(一)酸性溶液脱钙法
1.硝酸-间苯三酚液:
浓硝酸10ml,间苯三酚1g,通风橱内混合。混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。然后加10%硝酸 100ml。
骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。
优点:该液脱钙速度非常快,大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。
缺点:
(1)细胞核染色很差。
(2)如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。
(3)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少24小时。
(4)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
2.硝酸水溶液:浓硝酸5-10ml,蒸馏水加至100ml。厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。
优点:
(1)硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。
(2)对组织损害较少,细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。
(3)组织可直接通过70%乙醇去除酸。
缺点:脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
3.福尔马林-硝酸液:40%甲醛5ml,浓硝酸10ml,蒸馏水85ml。5mm厚的骨组织块脱钙时间需要1-3天。
优点:
(1)福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。
(2)该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。
(3)可作为紧急活检脱钙用。
(4)该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。
缺点:
(1)该液对细胞核作用较慢,使细胞核着色较差。
(2)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少12小时。
4.Perenyi’s 液:
10%硝酸4份,0.5%铬酸3份,无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点:
(1)该液是一种温和的脱钙液,可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
(2)细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
(3)推荐该液作为常规脱钙使用。
(4)组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点:
(1)脱钙较慢,因此,紧急情况下不能使用。
(2)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5.Von Ebener’s液:
饱和水溶液氯化钠 50ml,蒸馏水50 ml,浓盐酸 8 ml。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点:
(1)细胞核染色相当好。
(2)不需要水洗,脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点:使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6.甲酸液:
甲酸 10ml,10%福尔马林盐 90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点:
(1)脱钙同时可以对组织固定。
(2)对细胞核染色比较好。
(3)推荐用于小块组织和牙齿脱钙。
缺点:
(1)脱钙比较慢,不推荐作为常规标本脱钙使用。
(2)不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
(3)要用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少18小时。
7.三氯醋酸液:
三氯醋酸5g,10%福尔马林盐95ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要5-8天。
优点:
(1)对细胞核染色好。
(2)脱钙之后不需要水洗,酸乙醇可以去除。
缺点:
(1)脱钙作用慢,仅仅推荐用作骨的细针脱钙。
(2)不推荐作为密皮质骨脱钙使用。
8.Flemming’s液:
1%铬酸 15ml,2%四氧化锇 4ml,冰醋酸 1ml。
Flemming’s液虽然是一种固定液可作为微细骨针脱钙用。液体需要新鲜配制,并在容器底部会形成沉淀。脱钙后如果直接通过乙醇可以形成不能溶解的色素。脱钙之后标本必需充分流水冲洗去除过多的铬盐。使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。用苏木精染色时细胞核受抑制。
9.AFIP甲酸-柠檬酸钠液:
A液:甲酸25ml,蒸馏水25ml。B液:枸橼酸钠(结晶)10g,蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合,每日换1次,因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合,具有促进脱钙的作用。
10.蒋维中(Jangweizhong’s)液:
盐酸80ml。甲酸70ml,三氯化钙50g,冰醋酸25ml甲醛100ml,生理盐水900ml。
此液脱钙迅速,0.5cm厚的松质骨6-20小时就可以完成脱钙。对组织影响极小,染色效果好。配制简便,脱钙后不需要用碱性液中和。
(二)螯合脱钙剂脱钙法
EDTA是一种良好的脱钙液螯合剂,它对组织破坏极小,不产生气泡,不影响染色,如果加温至37℃,可以加快脱钙速度。
EDTA脱钙液:
乙二胺四乙酸(EDTA)5.5g,10%中性福尔马林100ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要7-21天。
优点:
(1)经EDTA脱钙的组织染色结果好。
(2)对组织的结构损害小。
(3)用化学方法测试可以确定脱钙的终点。
缺点:
(1)脱钙速度相当慢,不适合常规标本脱钙使用。
(2)脱钙后组织会稍微变硬。
资料由本人整理由于水平有限难免有不妥之处仅供参考。

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太精彩了,谢谢!!!

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   Thanks a lot.

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