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一名技术员的忏悔

一名技术员的忏悔

干病理技术差不多将近3年,而做免疫组化算算应该有一年多点的时间,在之前几个月一直都是跟着老师一起做,做出来结果都还好,也挺稳定的,后来就自己单独做,每一批片子出来自己都会先看看抗体的表达定位是否正确,不太明白的地方就问诊断的医师,结果反馈一直都是还可以,没什么不对的地方。直到前几个月,碰到了让我大惑不解的问题, 所有的操作步骤都是跟以前一样没有变化,但是结果出来就是有些抗体应该表达的没有表达,有的肿瘤组织Ki-67竟然是阴性的,要么就是表达的很弱(主要是要用EDTA修复的抗体),面对这种情况,就把以前的表达很好的阳性片找出来再次做对照做了一遍,结果依旧如此,最近做出的就是不表达或很弱,反复找原因,始终不得其解,原因出在哪,不明白,再想是不是跟二抗有关系(因为我们的一抗是两家公司的),后来就同时买了两家公司的二抗,在操作时,就配套的使用同一家公司的试剂,做出来后,结果依旧不满意,说明跟二抗是没有关系的。左思右想是不是跟固定有关系,打电话到制剂室去核对中性福尔马林的配方,发现制剂室中性福尔马林的配方是用国外的配方,我想这个按理说影响也不大呀,因为以前一直都是用这个配方,不也做出来了吗,原因肯定也不在这。面对每次的组化的结果,每次都是那几种抗体(需用EDTA修复的)都是做不出来,要么就是表达很弱,我迷惑了好久,始终想不出原因到底出在哪里,操作跟以前都是一样呀,该找的原因都找了,到底是什么原因,真的让人头疼。。直到前两个星期,自己脑子闪了下,是不是该考虑下烤片的温度和时间呢,之前是用65度烤4小时或者过夜(因为我们的医师有时开出的组化总是下午很晚,所以等我们切完就快下班了,只好把片子放入烤箱过夜)。后来就调整试着把所有的片子用62度烤2.5小时,结果出来,主任告诉我,说这批的免疫组化做的很好,该表达的都表达了,定位很准确,以前没做出来的这次也都做出来了,听到这话后,我欣喜了半天,反复的看了看片子,真的做出来了。接着后面的片子就一直都是62度烤2.5小时,近来的片子一切表达正常。我想我终于找到了原因,问题就在烤片的温度和时间上。然而,这两个星期我一直都在反思,在想一个问题,问什么不早点想到烤片温度的问题呢,这是一个再简单不过就可以解决的问题,竟然兜了这么一大圈,真觉得自己挺笨的,为什么不早点往这方面想,那样也就不会到现在才解决,一直都是在耿耿于怀。。。我想通过这件事情,我不得不说,做一名技术员不是简单地跟着老师学就可以了,也不是所有的老师操作就是规范的,一味着按部就班或许在短时间内不会出现问题,但时间长了,我想,肯定会有这样或那样的问题,会有更多需要自己去解决的事,所以只有自己不断的学习,学习规范化的操作,学习新的知识,才能够知道自己到底操作的规不规范,还要多思考,要多想做的每件事,为什么是这样,而不是做完就不管,不管结果。同时还要多实践,多摸索,多总结,唯有这样,才能让自己有进步,才能跟的上科学的步伐,才能做名合格的技术员。

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非常欣赏这样的钻研精神。不过实检还有一个漏洞:希望同一蜡块切二张白片,一张烤二小时,一张烤过夜,然后一起做试一下,多做几例,看看结果再下结论。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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我原来也是认为做好病理技术很简单,随着时间的推移和自己深入的学习,我才知道要学的东西太多,真的需要不断总结钻研,才能进步和提高自己!

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回复 2# 的帖子

首先非常感谢丁老师的欣赏。
至于说切二张白片,一张烤二小时,一张烤过夜,我反复做了几例,结果显示,过夜的就是阴性,而烤二小时的全部都有阳性,并且阳性强度都还可以。因为都是拿以前的阳性片做对照。也许就这几例并不能说明什么,但我想最起码烤片的温度和时间是影响结果的其中因素之一吧。
接受丁老师的建议,继续做对照。。。

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烤片的温度和时间对免疫组化结果肯定有影响,但62度2小时与65度过夜不应该会这么明显。以前我这有进修生做过实验对照,70度过夜,影响也不是很明显。总觉得那里还有问题。
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我到现在也一直似乎有些疑问,觉得烤片62度2小时跟65度过夜,区别真的有这么大吗?不过大部分抗体65过夜还是没有什么影响的,只是有些需要用EDTA修复的抗体就有影响了,如(CD10、CD15、CD30、CD35、WT1),这几个抗体(65度过夜)总是做不好,不是不表达就是表达的很弱。后来62度2小时做出来的结果就很满意。面对这种现象,我都不知道该怎么解释了。
请教丁老师。。。

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建议烤片时间和温度为:58-60°C度烤片2-3小时!
(本观点纯属本人意见!仅供参考!)

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我们一直是过夜烤片,效果还是挺好的呀,个人认为,跟烤片关系不是太大吧?

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我们也有两个病例做Ki67竟然是膜阳性,找了好长时间也没找到原因。要是我们的小姑娘如你这般,该多好啊

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引用:
原帖由 格言 于 2011-8-23 23:27 发表
我到现在也一直似乎有些疑问,觉得烤片62度2小时跟65度过夜,区别真的有这么大吗?不过大部分抗体65过夜还是没有什么影响的,只是有些需要用EDTA修复的抗体就有影响了,如(CD10、CD15、CD30、CD35、WT1),这几个抗 ...
非常好的经验,值得大家学习。像CD30,我们就发现用EDTA修复没有用柠檬酸高温修复的好,和你说的一样,表达很弱或有的细胞不表达;而柠檬酸高温修复表达就很好。这是否在65度与烤片过夜有关,看来要好好试一下。
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