免疫组化组织细胞的取材
从大体标本上切除适量的组织材料进行研究就是取材。取材不仅在免疫组化而且在常规病理检查中也十分重要。用于免疫组化的组织一般取材大小为1.OcmXl.OcmX0.2cra。取材时应剔除脂肪和钙化,否则会影响切片,出现假阳性或假阴性结果。
组织标本包括动物标本、手术活检标本、尸体解剖标本及细胞标本等,有关各种标本的取材方法分述如下。
一、动物的致死法及取材
(一)致死法
(1)空气栓塞法 向动物静脉内注入一定量的空气,使动物很快死亡。一般适用大动物,例如兔、犬、猫等动物。
(2)麻醉法 可将浸有乙醚或氯仿(三氯甲烷)的棉球连同动物一起放人密闭容器内进行麻醉,也可用4%戊巴比妥作静脉注射,或用20%氨基甲酸乙酯做腹腔注射。适用于鼠等小动物。
(3)断头法 用剪刀剪去动物的头部,待血液流出后立即取材。适用于小动物。
(4)去头法 用重物猛击头后部或将动物头后部猛撞桌沿。
(5)股动脉放血法 动物麻醉后,切开股动脉放血致死。
(二)取材注意事项
(1)
最好在动物心脏还在跳动时立即取材,并迅速投入环保组织固定液内。脏器的上皮组织易变质,争取在死后半小时内取材完毕,否则免疫组化染色时会产生背景染色。
(2)切取组织使用的刀、剪要求锋利,避免来回挫动组织。因动物组织质脆,因此夹取组织时切勿 用力过重,以免挤压损伤组织。
二、尸体解剖的取材
尸体解剖的取材应根据实际需要进行,一般取材部位和数量如下。
(1)心和大血管 右心室一块,左心室一块,主动脉一块,取材部位可在距主动脉瓣5cm处。
(2)肺 右下叶一块,切成正方形;左下叶一块,可切成长方形。
(3)肝 右叶一块,切成正方形;左叶一块,切成长方形。
(3)脾 一块。
(4)胰 一块。
(6)肾 两肾各一块,包括皮质、髓质和肾盂。右肾一块切成正方形,左肾一块切成长
(7)膀胱 一块。
(8)肾上腺 左、右各取一块。
(9)消化道 食管一块,胃窦部一块,小肠一块,淋巴结一块,直肠一块。
(10)骨 脊椎骨一块。
(11)胸腺 一块。
(12)子宫 宫颈和宫体数块。
(13)睾丸或卵巢 各一块。
(14)脑 左侧运动区一块,左侧豆状核一块,小脑一块。
(15)脑下垂体 一块,前叶或包括前后叶。
如有较严重或复杂病变时应适当增加取材数量,以便彻底检查而作出正确诊断。
三、活检标本的取材
(一)常规活检标本的取材
应注意病变的部位、形状、大小、颜色以及与周围组织的界限,有无完整的包膜。取材时应取病变部位、病变的切缘、病变与正常组织交界处以及远离病灶的正常组织。取材用的刀剪应锋利,避免挤压组织;组织的切面应平整,组织切忌过大、过厚,否则不仅浪费试剂,而且会造成固定、脱水不良而影响镜下观察。
(二)肾穿刺标本的取材
进行穿刺取得组织后,立即用生理盐水或PBS冲洗数次去除血迹,并迅速判断所穿组织是否为肾组织(肾组织应为暗红色)。当确定为肾组织后,立即将组织置于木板上,迅速测量其长度;用解剖显微镜或放大镜进行观察,以区别皮质和髓质,并观察标本是否有肾小球。在解剖显微镜下,肾皮质较淡,皮质区可见一些分布不规则、朦胧的红色小点,此即为肾小球。使用解剖显微镜可帮助区别组织,作出准确的判断,使肾活检可靠。穿刺所取得的标本用手术刀片切开,并迅速固定,一半放人装有光镜固定液的青霉素小瓶内,另一半放人装有电镜固定液的小瓶内,均置于冰瓶内保存。
(三)小标本的活检取材
小标本常见为宫颈、宫内膜、鼻咽、口腔、喉以及各种内窥镜所取得的组织。它们体积较小,因此取材时要用擦镜纸包起来再进行固定、脱水,
特别是由胃镜、肠镜等所取的组织,取材时一定要滴上伊红,以防止丢失。活检组织多用活检钳夹取,常因过度挤压而变形。病灶表面有出血坏死,活检时难于采取到深部组织。因此,活检钳的刀口必须锋利,活检时必须采取主要病灶区,尽量避开坏死区。