切片脱色的主要原因,往是染色过程造成:
1、盐酸分化后水洗时间短,往往是用温水或返蓝液后,冲洗时间不够。
2、苏木素已经过染(染色片数过多)或过氧化,结合能力差。
3、伊红过酸或过碱。
4、切片脱水不干净。
5、中性树胶pH值不是7
6、树胶浓度太稀。
7、组织过大,与盖玻片边缘太接近或露在外面。
8、自来水过酸或过碱。
9、用了某些缓冲液作返蓝液(我们曾经用TBS作机器染色的返蓝液,最后退色了,后来改自来水返蓝10分钟,解决问题)。
组织如果用过脱钙液,冲洗不干净,也容易退色。甲醛固定后没有冲水也可能会有影响,我想不应是主要原因。