muyouzi

我现在做大鼠脑组织石蜡切片的常规HE染色，老掉片
之前做的步骤：
10%中性福尔马林固定 6 h以上；
75%乙醇 35min
95乙醇Ⅰ 35min
95%乙醇Ⅱ 35min
100%乙醇Ⅰ 25min
100%乙醇Ⅱ 25min
二甲苯Ⅰ 7min
二甲苯Ⅱ 10min
浸蜡Ⅰ(60℃) 1 h
浸蜡Ⅱ 2 h
包埋切片3 μm，60℃烤片过夜，之后脱蜡常规HE染色。。。
因为脑样不够了，如果是脱水不彻底造成的脱片，那有补救措施么？可以再重新把蜡块融蜡，把脱水的时间延长再重做一遍么？
高手请指点啊，盼回复！！！

熊成勇

你认为脱水脱好吗

痞子张

我觉得是可以把蜡块融掉，但是要先脱蜡到酒精然后再回来脱水、透明、浸蜡。

建议：
10%中性福尔马林固定 12h以上；
75%乙醇 1min
95乙醇Ⅰ 1min
95%乙醇Ⅱ 1min
100%乙醇Ⅰ 40min
100%乙醇Ⅱ 40min
二甲苯Ⅰ 15min
二甲苯Ⅱ 15min
浸蜡Ⅰ(60℃) 2 h
浸蜡Ⅱ 3 h


请问各位老师这样做可行吗？？？
期待各位老师指点！！！

[ 本帖最后由 痞子张 于 2009-10-15 21:40 编辑 ]

6504339

固定时间太短，我们这边大鼠小鼠组织都 是 在 固定24小时候 取材脱水，脱水时间太短，大鼠时间在低浓度在45min以上，无水1H ！
先用挂胶片试试，如果还掉片才考虑重新脱水，融掉蜡后，放入二甲苯15分钟，在放入无水酒精半小时，水洗至组织发软，再按照脱水过程重新脱水。建议用 挂胶片！
楼上的 方法肯定不 行，处理后的 脑组织切出来的 估计 都 是 粉末了！

jiaguotao

60度过夜？
60度过夜？

adriana

脱水没有问题！是烤片的问题！过尤不及