固定液
123老师你所说的问题,就应用范围来说10%福尔马林应用范围较广,是一种较常用的固定剂。不同的研究目的选用不同的固定剂。实际上没最好的固定剂。不同固定液的配方适合于不同研究。
10%中性缓冲福尔马林
用途:10%中性缓冲福尔马林是一种良好的常规固定剂。此液是在低渗缓冲离子中pH6.8
试剂:
磷酸二氢钠(monohydrate)4.0g
磷酸氢二钠 (anhydrous) 6.5g
甲醛 37% 100.0ml
蒸馏水 900.0ml
固定时间:标本固定1~4小时/mm,大标本应延长固定时间。
步骤:
1.多数外科病理标本都能接受甲醛固定。
2.组织脱水机前两个位置最好使用中性福尔马林固定液。
3.标本可以无限期的保持在10%福尔马林中或转移到70%乙醇中。
ZENKER’S液
用途:Zenker’s 液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂,对细胞核固定最好,最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂,在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenker’s 液固定。
试剂:
Zenker’s 贮备液:
氯化汞 50.0g
重络酸钾25.0g
硫酸钠10.0g
蒸馏水 1000.0ml
充分混合,稳定性2年。
Zenker’s 工作液:
Zenker’s 贮备液 95.0ml
冰醋酸 5.0ml
用前混合,固定时间:12-36小时。
步骤:
1.由于Zenker’s 液中含氯化汞,固定后必须脱去汞色素。
2.组织必须用流水冲洗去除重络酸钾否则乙醇脱水会引起络色素。
B-5固定液
用途:B-5固定液是骨髓活检常规固定液,并且在怀疑淋巴瘤时固定淋巴结。
试剂:
B-5贮备液:
氯化汞12.0g
醋酸钠 2.5g
蒸馏水 200.0ml
充分混合,不使用任何金属用具或金属类盖子,
贮备液自配制之日起稳定性1年。
工作液:
贮备液20.0ml
甲醛 2.0ml
使用前立即混合。处理:把使用过的B-5固定液倒进玻璃瓶中标明“B-5废液”不要倒入下水管道。
固定时间:2~4小时,在容器上注明时间,不要遗忘过夜。
步骤:
1.经过固定的标本保留在10%福尔马林或70%乙醇中。
2.B-5液固定的组织切片含有汞沉淀在染色前必须进行脱色素处理( 脱蜡后:① Lugol’s碘:5min,水洗。②5%硫代硫酸钠:5min ,水洗并按照染色步骤要求进行染色)。
BOUIN’S固定液
用途:是一种良好的外科活检标本常规固定液。也常作为媒染剂使用。对脂肪组织的固定效果较好,适用于含脂肪较多的组织标本的固定。如含脂肪较多的淋巴结、脂肪瘤、乳腺组织等。
试剂:
Bouin’s 固定液:
饱和苦味酸 3000.0ml
甲醛1000.0ml
冰醋酸 200.0ml
固定时间:小块活检组织固定2~4小时,大标本可固定3天。
步骤:
1.经过固定的组织可保持在10%福尔马林或70%乙醇中。
2.染色前脱掉组织中的苦味酸 ①自来水冲洗 ②50%乙醇 ③或70%乙醇饱和碳酸锂
乙醇BOUIN’S液(DUBOSCQ-BRAZIL FLUID)
用途:用于固定肾活检,组织学制备固定液。
试剂:
乙醇Bouin’s贮存液:
80%乙醇 750.0ml
甲醛300.0ml
苦味酸 5.0g
充分混合,液体稳定性2年,标明配制日期。
工作液:
贮存液 70.0ml14.0ml
醋酸5.0ml10.0ml
使用前加醋酸。
固定时间:1~4小时。
步骤:
1.把新鲜组织标本放进乙醇Bouin’s 工作液中。
2.充分固定后把组织移到70%的乙醇中。
HOLLANDE’S固定液
用途:作为胃肠和前列腺活检基本固定剂,这种固定剂让H.E染色更清晰,它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
Lillie认为该液是一种很好的骨髓活检标本固定剂,固定液中的醋酸可以脱钙。
试剂:
乙酸铜 75.0g
蒸馏水 3000.0ml
苦味酸 120.0g
甲醛300.0ml
冰醋酸 45.0ml
不要加热用蒸馏水溶解乙酸铜,慢慢加入苦味酸,搅拌至溶解。加入甲醛和醋酸。标明配制日期。
固定时间:小标本2~4小时,大标本4天。
步骤:
1.活检标本要立即放入Hollande’s固定剂中,标本容器上注明时间。
2.标本完成固定后保持在70%乙醇中。
3.不能让Hollande’s液固定的标本与磷酸缓冲福尔马林接触,否则会出现蓝色沉淀。
ORTH’S液
用途:用于证实肾上腺胞浆中嗜络微粒,这种证明可能对嗜络细胞瘤的诊断很重要。不是一种好的多用途的固定剂。
原理:嗜络微粒被络染成橙色到棕色,pH 5~6反应最强烈。
试剂:
Orth’s贮存液:
重络酸钾25.0g
硫酸钠10.0g
蒸馏水 1000.0ml
充分混合,标明日期。
Orth’s工作液:
Orth’s贮存液50.0ml
使用前加37%甲醛5.0ml
固定时间:固定24小时。
1.标本固定后一定用水洗。
2.然后再将标本放在70%乙醇中。
4%多聚甲醛固定液:
用途:进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定(动物器官经该液灌注后,然后取材,再用该液浸泡2-24小时)也常选该固定液固定。
试剂:
多聚甲醛 40g
PBS0.1 mol/L PH 7.4 500 ml
混合后加热至60℃,搅拌并滴加1N NaOH 至清亮为止,冷却后加PBS 至总量1000 ml。
注固定时间24小时。