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请教:He染色出现脱色现象

请教:He染色出现脱色现象

菜鸟在尝试做HE染色,尝试了酸化伊红配方和水+乙醇+冰醋酸配方,结果两种染液水洗后效果都挺好,但封片后发现有些片子脱色非常严重,请问是什么问题,难道是在二甲苯中时间过长?因为片子之间只有在二甲苯中的时间不一样(我封片速度比较慢导致的)。下面是我摸索的HE步骤

二甲苯㈠ 30分钟,

二甲苯㈡ 15分钟;
100%乙醇 3分钟,

95%乙醇 3分钟,

80%乙醇 3分钟,

70%乙醇 3分钟,

一相水 3分钟;
苏木素染色10分钟以上,一相水冲洗干净;
过一下1%盐酸酒精,流水返蓝15分钟;
伊红溶液染色2分钟,一相水冲净;
过一下80%乙醇,

95%乙醇㈠  1分钟


95%乙醇㈡   1分钟      

100%乙醇㈠  1分钟

100%乙醇㈡ 1分钟
二甲苯㈡  1分钟,

二甲苯㈠  2分钟;
中性树胶封片



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