xysmile

大家好，最近在做免疫组化遇到了些问题，在网上搜索寻求方法时，正好看到这个论坛，觉得非常好，我想向大家询问一下几个问题：
（1）一抗我用的是兔抗鼠的多克隆抗体，其说明书上写的成分里含有50%的甘油等其他成分，我在使用的时候是不是就按照说明书的稀释比例，直接用PBS(10mM，pH7.2-7.4）的缓冲液稀释即可？
（2）一抗的多克隆抗体经过亲和纯化了下，（说明书中有写，但是没有仔细讲，只有Affinity Purified），那我在做阴性对照的时候，是不是只用正常的没有经过免疫的兔血清代替一抗就可以了？还是这个对照，必须也用经过亲和纯化的正常非免疫兔血清代替一抗？
（3）阴性对照的正常非免疫兔血清是否要和一抗，按照同样的稀释比例稀释？
谢谢大家！

[ 本帖最后由 xysmile 于 2010-10-28 11:24 编辑 ]

shanghainese

引用:

原帖由 xysmile 于 2010-10-27 20:43 发表
大家好，最近在做免疫组化遇到了些问题，在网上搜索寻求方法时，正好看到这个论坛，觉得非常好，我想向大家询问一下几个问题：
（1）一抗我用的是兔抗鼠的多克隆抗体，其说明书上写的成分里含有50%的甘油等其他成分 ...

回答.

（1）  可以用PBS(10mM，pH7.2-7.4）的缓冲液稀释,但是不要用作长期保存使用。
（2）用正常的没有经过免疫的兔血清代替一抗就可以了， 不必经过亲和纯化（无法进行亲和纯化，affinity purification。亲和纯化要用抗原来纯化）。
（3）阴性对照的正常非免疫兔血清要和一抗，按照同样的稀释比例稀释。

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2010-10-28 13:20 编辑 ]

xysmile

谢谢版主解答