摞贝

  目的：利用CD31免疫组化鉴定大鼠内皮细胞
    流程：
1.  细胞爬片
2.  4％多聚甲醛固定30min     
3.  30 ％过氧化氢1份  加 纯甲醇 50份，室温浸泡30min
4. 5％BSA室温封闭20min
5. BD公司一抗（小鼠抗大鼠)适当稀释后，4度冰箱过夜，第二天37度45min.
6.  羊抗小鼠 二抗室温20min
7. SABC室温20min
8. DAB显色30min
9. 苏木素复染2min
10.碱水返蓝。
   有做过的老师请指正，感激不尽。。。

shanghainese

CD31应该在细胞膜上。
你的 isotype control 呢？

摞贝

CD31好像是在胞浆里额

shanghainese

TLD-3A12，你用的是这个克隆吗？
The TLD-3A12 antibody is tested for immunohistochemical staining of acetone-fixed frozen sections and zinc-fixed
paraffin sections.
它是不能用在多聚甲醛固定的组织细胞上的。

摞贝

晕 死了。。。。。

shanghainese

用丙酮固定.

悠悠我心

我做过冰冻片，多聚甲醛固定后再修复可以做出来。不修复就做不出来。

shanghainese

引用:

原帖由 悠悠我心 于 2012-5-9 18:56 发表
我做过冰冻片，多聚甲醛固定后再修复可以做出来。不修复就做不出来。

冰冻片丙酮固定,就不需要修复这一步骤了.

摞贝

您好，我做的是细胞爬片   可以用丙酮固定吗？  您做的是石蜡切片还是细胞爬片呢？

摞贝

细胞爬片可以  修复吗？  如果能的话是  枸橼酸钠修复吗？