dingwei

排除没有加到一抗、检测系统和DAB。

shanghainese

请说明一下详细情况。

dingwei

1、0。3%甲醇双氧水阻断20分钟。蒸馏水洗
2、EGTA水煮抗原修复25分钟后，快速拿出放入冷水冷却。
2、一抗、二抗、DAB加的量都很多，肯定覆盖住，没有干燥。
3、结果出来，7块组织边缘有几块都有不着色现象。几张片子都一样。

xiangyanhere

丁老师：我前段时间也遇到了这个问题，不过我是集中在一侧。会不会是在二抗滴加的时候，组织上还有少量水珠，正好湿盒略微倾斜，水珠流于一侧较多，导致抗体稀释，表达不佳引起

shanghainese

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-6-14 22:29 发表
1、0。3%甲醇双氧水阻断20分钟。蒸馏水洗
2、EGTA水煮抗原修复25分钟后，快速拿出放入冷水冷却。
2、一抗、二抗、DAB加的量都很多，肯定覆盖住，没有干燥。
3、结果出来，7块组织边缘有几块都有不着色现象。几张 ...

照片里这几个组织怎么这样圆? 是不是做tissue array?

[ 本帖最后由 shanghainese 于 2012-6-15 22:26 编辑 ]

dingwei

是的

shanghainese

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-6-15 22:43 发表
是的

估计是第二次包埋时，外围的组织细胞受到影响，抗原发生了不可逆反应。

dingwei

排除此原因，其中有一张做同样的抗体，全部表达都是好的。

王华

脱蜡剂、酒精是新换的吗？

shanghainese

引用:

原帖由 dingwei 于 2012-6-16 13:15 发表
排除此原因，其中有一张做同样的抗体，全部表达都是好的。

是同一个蜡块吗?
如果是同一个蜡块, 有问题的切片在先，还是在后？