天竹石

请教有哪位老师做过组织切片的凋亡检测？
组织处理要特别注意哪些方面？
还有tunel的效果如何？》
先谢谢指教！万分感谢》

shanghainese

不知你想做那些apoptosis凋亡相关物？
欢迎你来参加讨论，以及分享你知识和成果

liuhuaqin

最好用冷冻切片。

天竹石

shanghainese老师你好！
我做的是膀胱癌石蜡切片的凋亡检测（原位缺口末端原位标记技术），买了R&D公司TUNEL试剂盒，已经做了10张实验，严格按试剂盒说明步骤进行，8张膀胱癌普通切片一点阳性细胞反映都没有。除了两张：一张买来阳性对照片与一张膀胱癌普通切片（都按试剂盒的说明在处理的过程中加了核酸酶处理），其上面的大部分细胞都表达了！
问了试剂公司也讲不出很说服人的原理！
想请问各位问题到底会哪里呢》
还有凋亡细胞DNA断裂的3'-OH末端在普通条件下稳定吗》会不会受什么试剂或物理条件而丢失或隐藏？
再次先感谢各位老师给于支持！

天竹石

谢谢liuhuaqin老师，您是不是做过TUNEL实验，冰冻切片效果到底如何》石蜡切片效果就很差吗》
还有哪家公司的TUNEL盒效果比较让人满意？
目前我还没做冰冻切片！
还有谢谢哪位老师可以上传些TUNEL的照片好吗？

shanghainese

引用:

下面引用由天竹石在 2005/01/12 10:42pm 发表的内容：
我做的是膀胱癌石蜡切片的凋亡检测（原位缺口末端原位标记技术），买了R&D公司TUNEL试剂盒，已经做了10张实验，严格按试剂盒说明步骤进行，8张膀胱癌普通切片一点阳性细胞反映都没有 ...

我对TUNEL染色的经验不多。R&D Systems公司的质量是不错的，他们的产品应该没问题。不然一张买来阳性对照片与一张膀胱癌普通切片就不会阳性。至于其他切片阴性，要考虑其组织蜡块是否不好，再有不是所有肿瘤都会阳性。
我如有说的不对，请原谅。

天竹石

[这个贴子最后由天竹石在 2005/01/13 09:36pm 编辑]

当然还是谢谢SHANGHAINESE老师的回复！
买来的阳性对照与那张普通片都是加了核酸酶的。
不管任何片加了核酸酶处理表达都该很强烈，因为DNA大量的认为破坏！
只是我们一些标本按理论上也该有表达！
不知道TUNEL对组织处理的要求是否很高！
或者TUNEL试剂盒出来的效果都不理想！
还有哪位老师有TUNEL的经验啊》
给俺说说好吗》谢谢啊！

shanghainese

天竹石朋友：
我很高兴与你一起讨论你的实验结果。
我认为：
1  你的试剂没问题。
2  你的实验操作没问题。
3  你的另外八张膀胱癌切片阴性是因为里面没有DNA破坏的细胞。
有的肿瘤刁亡细胞多，有的少。细胞在刁亡过程中有很多步骤。TUNEL阴性只是细胞还没有到DNA破坏核碎裂阶段。
说错之处，请指正。谢谢！

meizhou

我打算做冰冻切片TUNEL实验，不懂之处还请各位老师多指点呀

meizhou

我的QQ号码是55323032，欢迎大家和我讨论细胞凋亡检测方法的实验经验和心得，欢迎赐教。身份验证请注明细胞凋亡。