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阴性对照与阳性的是一样的,怎么办?

阴性对照与阳性的是一样的,怎么办?

我用SABC法,3%H2O2,30min;胰酶修复,30min;5%BSA,1h;一抗4度过夜;二抗、三抗各30min。
不知道是哪里出了问题,阴性对照与阳性片子总是一样的,真是急人,请大家帮帮忙,看是哪里出的问题,应该怎么改动,才好
先谢过了!

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说明这些可能是检测试剂盒的假阳性表达。不加一抗不加二抗直接加酶其他条件不变做个实验来证实一下,如果是检测试剂盒的问题就好解决,1。提前封闭内源性生物素。2。把你现在的试剂盒更换成非生物素系统就可以了。

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好的 ,我一会试试。

提前封闭内源性生物素是什么意思,在哪一步之前封闭/?

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请把照片转上来让我们看一看。

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还是不太明白,我的是石蜡切片,girlly的意思是在修复前用5%BSA封闭吗?
还有如何能知道抗体是否污染?

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怎么发照片?

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一抗是兔抗人的,二抗是山羊抗兔的,我用试剂盒里的BSA封闭的,用正常山羊血清也封闭过,但感觉没有BSA好
另外我用5%H2O2的背景要清晰一些

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To fangdang: 不加一抗和二抗只加酶的结果与全都加的结果是一样的!
                     你说的提前封闭内源性生物素是指将5%BSA用在修复之前吗?

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