好好

近来做的小鼠脑片的冰冻切片中出现很多的“空洞”。这是否是由于没有用液氮等速冻至-70度，而是缓冻造成了“冰晶”？该如何避免？
急盼丁老师等给予解答！！！
做些片子真不容易，每一步都会出现各种问题！   :em16:  :em16:

frankbj

脑组织冰冻切片容易出现空洞，建议用液氮速冻

好好

frankbj 好：
    我的小鼠是用生理盐水、多聚甲醛灌流固定后，多聚甲醛室温后固定2小时，20%蔗糖脱水（4度，过夜），然后冰冻切片。这样可能不需要用液氮速冻吧？
    我现在考虑可能是我固定脱水的时间不够，我打算延长后固定、脱水的时间试试看。不知我的想法对吗？

zrz904

缓慢的冰冻。易出现固定的不均匀而出现空洞。建议快速冰冻，均匀才是关键。

双面人

我的也是好多空洞

shanghainese

引用:

原帖由 好好 于 2003-8-12 18:30 发表
frankbj 好：
    我的小鼠是用生理盐水、多聚甲醛灌流固定后，多聚甲醛室温后固定2小时，20%蔗糖脱水（4度，过夜），然后冰冻切片。这样可能不需要用液氮速冻吧？
    我现在考虑可能是我固定脱水的时间不够，我 ...

仍然需要速冻！

蓝斑

20％蔗糖过夜脱水，脑组织有没有沉底？或者是不是可以考虑用30％的蔗糖脱水？
我倒不觉得一定要速冻，我做过大鼠的冰冻切片，只用蔗糖脱水就没有很多空泡的。我做的是脑。

shanghainese

引用:

原帖由 蓝斑 于 2007-10-25 17:17 发表
20％蔗糖过夜脱水，脑组织有没有沉底？或者是不是可以考虑用30％的蔗糖脱水？
我倒不觉得一定要速冻，我做过大鼠的冰冻切片，只用蔗糖脱水就没有很多空泡的。我做的是脑。

jianjie

一般来说，含水丰富的组织容易产生冰晶。冰晶形成一般在-20到-40度。有两种方法可以解决。一是急冻。二是用20%-30%蔗糖沉底。第二种方法我用的很多，比较有效。