铁牛

组织片都是用福尔马林固定的，倘若用95%酒精固定对免疫组化表达影响大吗？倘若有影响应该用什么方法减小影响呢？

shanghainese

酒精固定会有影响。
福尔马林固定也会有影响。

vitaminpp

多聚甲醛固定影响要比甲醛小

shanghainese

引用:

原帖由 vitaminpp 于 2011-3-30 15:33 发表
多聚甲醛固定影响要比甲醛小

请您讲出道理来。

vitaminpp

引用:

原帖由 shanghainese 于 2011-4-18 07:24 发表

请您讲出道理来。

甲醛固定液
主 要包括10%福尔马林（40%甲醛与蒸馏水之比为1：9），10%中性福尔马林（10%福尔马林喊饱和碳酸钙）和10%中性缓冲福尔马林（40%甲醛与 0.01mol/L PBS之比为1：9）三种，以第三种应用最广。甲醛在有效保护某些抗原的同时，能很好保持组织形态结构的完整。但由于甲醛使蛋白质发生交联而起固定作用， 这样会影响细胞膜的通透性，有时会使大分子抗原丧失其活性。经甲醛固定过的组织，大多数抗原在免疫染色前必须经蛋白酶消化，以打开抗原决定族，使阳性率及 阳性程度有明显的提高，但消化也可破坏某些抗原。用甲醛固定时以不超过24h为宜。

4%多聚甲醛
用0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.3）配置而成（必要时加少许1mol/LNaOH使溶液清凉）。适用于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续固定2-24h。该固定剂较为温和，适用于组织标本的长期保存。

目 前，免疫组织化学研究中常用的固定剂仍然是醛类固定剂，其中又以多聚甲醛和戊二醛最为常用。多聚甲醛和戊二醛都是交联固定剂，既能更好的保存组织细胞的形 态结构，又能使蛋白质得以固定。尤其是戊二醛，因为其有两个醛基，交联连接的能力更强。对于小分子的抗原，如肽类激素，只有用交联固定剂才能得到良好的固 定并且是抗原得到较好的保存。然而，醛固定剂也有缺点，即由于广泛形成的交联连接，可以造成某些抗原被掩盖，甚至导致抗原变性，特别是对大的蛋白质抗原。 这样的缺点在戊二醛表现得更加突出，所以在光镜标本中一般不使用戊二醛，只是在电镜标本中为了利用戊二醛两好的保存组织细胞超微结构的优点，而在多聚甲醛 固定液中加入适量的戊二醛。在光镜标本的固定中，也常常使用Bouin固定液，它能迅速穿透组织，使固定充分，又不引起组织收缩，其中的苦味酸可以沉淀蛋 白质。

shanghainese

引用:

原帖由 vitaminpp 于 2011-4-18 14:08 发表


甲醛固定液
主 要包括10%福尔马林（40%甲醛与蒸馏水之比为1：9），10%中性福尔马林（10%福尔马林喊饱和碳酸钙）和10%中性缓冲福尔马林（40%甲醛与 0.01mol/L PBS之比为1：9）三种，以第三种应用最广。甲醛在有效 ...

您的这个道理是不正确的。

dingwei

1、抗原的固定原理我个人觉得书上说的存在一定的问题：福尔马林固定会引起交联反应，使大部份抗原决定簇被封闭，因此需要修复才能暴露。那95%酒精固定的组织，从理论上说没有这样的反应，按理不需要修复，但实际上并不是这样，很多抗原也需要修复，修复后，阳性强度和阳性数量明显提高。所以我想，抗原的封闭，不仅仅只是交联反应，还应该有其他原因。
2、95%酒精固定的组织，膜与浆抗原明显强于用10%中性缓冲福尔马林的组织。而核抗原明显差于10%中性缓冲福尔马林（理由我先不说，大家思考一下为什么）。二者结果存在很大的差异，但我们的判读结果（国际通用）都是按10%中性缓冲福尔马林的，因此，用95%酒精固定会给诊断和治疗（特别是靶向药物治疗）带来很大的影响，所以慎用。
3、环保型固定液说白了就是75%酒精，因此也要慎用。

cabbage

酒精属于沉淀式固定液，优点：有利于ISH时核酸探针穿透性
                                          缺点：不利于细胞形态保存；组织变硬；待检核酸丢失，染色偏弱等。
   10%中性福尔马林属于交联式固定液，优点：有利于核酸保护；有利于组织形态保护
                                                              缺点：不利于探针穿透
其实不同的组织固定所需的固定剂也不同，但10%的中性福尔马林对大多数的组织都比较适用，所以我们平时工作中推荐大家用10%中性福尔马林固定组织。

xkj2797xkj

醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质的保存效果较差！