lengkudaod

本人刚参加工作一年，刚才浏览本站真的是很受教育，，我们这里技术都是师徒模式，，技术没有出去进修一说，记得刚开始老技术员告诉我的免疫组化过程是：（1）早上上班烤片（在电炉子上烤，时间控制完全凭经验，就是看到蜡烤化，在不烤糊这之间），（2）二甲苯3个，每个脱蜡15分钟。（3）用热水冲洗二甲苯（就是烧开的热水2个缸每缸30秒）。（4）蒸馏水冲洗3遍（每张片子覆盖蒸馏水后就甩干，中间没有间歇时间，后面水洗和PBS冲洗同此过程）。(5)滴加过氧化氢10分钟，蒸馏水洗3遍（师傅的解释是增强免疫组化的上色）。(6)高压修复（先将柠檬酸在高压锅里加热至沸腾，然后将切片置于锅内，个人觉得从片子放入锅内到高压锅喷气至少需要4-5分钟），高压锅喷气后2分钟。然后高压锅迅速放入自来水下冲洗2分钟左右，然后室温冷却。（7）PBS冲洗3遍，滴加相对应的一抗室温3小时左右（上午工作结束）(8)下午上班PBS冲洗3遍滴加二抗室温20—30分钟。(9)PBS冲洗滴加3抗室温20—30分钟，PBS冲洗。（10）滴加DAB染液3—5分钟，自来水冲洗。（11）苏木素复染4分钟，盐酸酒精分化，氨水反蓝，4个梯度酒精，3个二甲苯，封片。我们这里2002年就已经开展了免疫组化。这个步骤一直沿用至今。今年我将滴加过氧化氢放在高压修复之后滴加，烤片70度，烤2——3小时，其余步骤不变，请各位老师能否给一个标准的免疫组化步骤？

xkj2797xkj

效果如何？（个人觉得有好多不妥的地方）

[ 本帖最后由 xkj2797xkj 于 2011-8-28 14:47 编辑 ]

shanghainese

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天涯无风

用热水冲洗二甲苯可能会减少酒精对组织抗原的损害，但是二甲苯能洗的干净吗？

lmafu1985

水跟二甲苯不是不互溶吗？能冲洗干净？

shanghainese

四楼五楼两位朋友的问题问得非常好。谢谢！

chensenlin

这种操作是非常错误的,从烤片开始就应该改正,难道你们温箱都没有吗?使用二甲苯脱蜡又为什么要用热水呢?我真的不明白,免疫组化部分影响不是很大,但是在免疫标记前的步骤必须改正

dingwei

酒精没二甲苯会对组织抗原有影响？那儿看来的？有没有实验证明？你和用热水比较过吗？

王华

二甲苯脱蜡后不用酒精脱二甲苯吗？直接从二甲苯到热水？
免疫组化效果稳定吗？

xiaoniou777

那么大家说了半天，有没有标准的免疫组化染色步骤呢？