CD133抗体
那位老师做过CD133抗体,我买了德国美天旎公司浓缩型的,我是做得脐血提纯的干细胞,我始终是阴性的。1、标本来自人的脐血提纯干细胞
2、干细胞涂片
3、95%乙醇固定60分钟;
4、60℃考半小时。
6、高压EDTA(PH=9.0)修复1~1.5分钟。
7、蒸馏水2 min。
8、3%H2O2孵育10 min。
9、
蒸馏水3次各2 min。
10、一抗(CD133)孵育(抗体稀释液配制,滴度1:5,1:10,1:20,1:50,1:,100湿盒)
4℃过夜(同样稀释度,同时以做过37℃一小时)。
11、PBS清洗标本3次各2 min。
12、二抗工作液孵育基因公司兔/鼠通用型试剂盒37℃ 30 min。
13、PBS清洗标本5次各2 min。
14、DAB显色(避光,镜下观察至棕色)约10~15min。
备注:组织脱蜡到水,高压EDTA(PH=9.0)修复1~1.5分钟以下步骤相同。