infi

步骤如下：确诊乳腺癌蜡块切片2um，65摄氏度烤片4小时，二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各两缸5分钟，自来水冲洗，PBS 2min*3,3%过氧化氢去离子水25摄氏度5分钟，胃蛋白酶消化液37摄氏度8分钟，EDTA高压热修复140摄氏度3分钟（阀门窜气后计时），高压锅放入冷水中冷却，阀门降下后，拿出EDTA塑料盒，放入冷水冷却，一抗4摄氏度过夜（一般16小时左右），二抗37摄氏度30分钟，DAB显色，各步骤之间均PBS 2min*3。
用上述方法做其他抗体均正常，唯独ki-67始终阴性，试过一抗25摄氏度过夜、二抗37摄氏度30分钟也不见阳性。产品为中杉金桥公司，克隆号：K-2 。
请问各位老师问题应该出在哪里。

infi

哦，我们用的是invsion二步法。

shanghainese

引用:

原帖由 infi 于 2012-11-13 11:29 发表
步骤如下：确诊乳腺癌蜡块切片2um，65摄氏度烤片4小时，二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各两缸5分钟，自来水冲洗，PBS 2min*3,3%过氧化氢去离子水25摄氏度5分钟，胃蛋白酶消化液37摄氏度8分钟，EDTA高压热修复14 ...

建议你不要用K-2 这个克隆。
推荐你用克隆MIB-1（DAKO) 或 B56 (BD)。

韩玉宁

批号是哪个批次？

infi

谢谢老师，B56这个克隆号的抗体也是中杉金桥的吗，没查到。另外，克隆号7B11的可不可以？
再麻烦您一下，P53和C-erbB-2您用的是哪个克隆号的？

infi

产品批号：11440408

shanghainese

引用:

原帖由 infi 于 2012-11-14 10:51 发表
谢谢老师，B56这个克隆号的抗体也是中杉金桥的吗，没查到。另外，克隆号7B11的可不可以？
再麻烦您一下，P53和C-erbB-2您用的是哪个克隆号的？

B56这个克隆是BD的克隆，您可以BD中国分公司联系。 克隆7B11，不了解不发表意见。
P53，您可以用克隆 Bp53-12。
c-erbB-2，您可以用 DAKO的多抗A0485。

infi

谢谢老师了！

shanghainese

不用客气。

yuwenlong

我用的是迈新的抗体，Ki-67用柠檬酸高压修复，很稳定。