zhaozhigang

版主老师，请教间接免疫荧光的方法
一抗是不是一定要进口的阿
二抗呢，中山公司的FITC标记的可以吗，他们自己说是进口分装的
如果可以，怎么稀释呢
还有抗体稀释是不是用PBS好些呢
谢谢！

lacrimosa

可以用PBS稀释。一般说明书上有稀释比例的，但具体要看你的抗原含量。一抗稀释最好做个梯度，我们做的是一抗按1：100，1：200，1：400，1：800的梯度稀释，二抗是羊抗小鼠IgG,稀释度是1：200。不好意思，我才开始做免疫组化，懂的不多。

zhaozhigang

多谢
再请问步骤和荧光2抗是那家公司的

shanghainese

引用:

下面引用由lacrimosa在 2004/12/19 11:15pm 发表的内容：
可以用PBS稀释。一般说明书上有稀释比例的，但具体要看你的抗原含量。一抗稀释最好做个梯度，我们做的是一抗按1：100，1：200，1：400，1：800的梯度稀释，二抗是羊抗小鼠IgG,稀释度是1：200。不好意思，我才开　...

很对。应与奖励。

可乐猫

间接免疫荧光法步骤如下（别的组织我还没做过只做过皮肤，所以仅供参考）
我用正常人皮肤或小白鼠舌做冰冻切片吹干当底物；
PBS洗，DW洗共2-3次吹干。
滴加各种稀释度的患者血清（1：20；1：40；1：80；1：160；1：320；……）37度恒温水温箱内，30分钟。
PBS洗，DW洗吹干。
滴加IgG抗体，进口的1：100，现在已不买进口的了太贵！ 国产的北京邦定公司的羊抗人1：10，在恒温水温箱内37度30分钟。
PBS洗二次，DW洗每次8-10分钟。
甘油缓冲液封片
荧光显微镜观察。

zhaozhigang

请问可乐猫版主
我都一抗是小鼠或兔源的，用羊血清封闭可以吗

fangdang

我都一抗是小鼠或兔源的，用羊血清封闭可以吗 ？可以，封闭用的羊血清是非免疫的。

shanghainese

引用:

下面引用由zhaozhigang在 2004/12/20 10:32pm 发表的内容：
请问可乐猫版主
我都一抗是小鼠或兔源的，用羊血清封闭可以吗

应该可以。