yinogirl

我最近跟着国外的一篇文献在做免疫组化，他用的是国外一家公司的antigen decloaker，我自己用的是中衫的柠檬酸盐缓冲液，现在作出来什么结果也没有，构成性表达的抗原也没有显示，不知道是哪个环节出了问题，请教各位怎么办，谢谢啦！

shanghainese

antigen decloaker 应该是10X pH 6.0 柠檬酸盐缓冲液.
http://www.biocare.net/equipment.htm

fangdang

做不出结果有许多原因，antigen decloaker是抗原修复液通常是指0.01M的citrate。就此你可能没错。没有详细的操作步骤说明，帮不了你。

liuhuaqin

最好是按自己购买试剂的说明书进行操作。

yinogirl

我用的抗体还没有商品化，是别人自己制备的单抗，操作步骤都是按照她们的文献来的，从高压修复条件，到一抗二抗浓度基本上都按照那篇文献来操作，由于做不出来，曾经试过很多其他方法，但是始终没有任何结果，真不知该怎么补救，还有，跟烤片的温度有没有关系啊，我一般都是70度，之前几个抗体都做的挺好，为什么这个出不来呢。

liuhuaqin

烤片70度多长时间？高压修复的时间？着色部位？一抗浓度是多少？是否做过阳性对照？

yinogirl

70度15分钟，高压10kpa3分钟，一抗从0.7，1.4，2.8一直到11.2都试过，阳性对照也作不出来，阳性定位根据文献应该是在小肠粘膜上皮，类似于神经内分泌细胞定位的细胞浆内，我用过回肠，结肠都作不出来，是不是抗体有问题啊？

shanghainese

引用:

下面引用由yinogirl在 2005/06/16 11:14am 发表的内容：
我用的抗体还没有商品化，是别人自己制备的单抗，操作步骤都是按照她们的文献来的，从高压修复条件，到一抗二抗浓度基本上都按照那篇文献来操作，由于做不出来，曾经试过很多其他方法，但是始终没有任何结果，真 ...

也许您的这个抗体不能用在石蜡切片上。
不如在冰冻切片是试试。

liuhuaqin

70度15分钟烤片时间短，可延长到1h左右。抗原修复可用微波中档10分钟。主要考虑一抗的问题，可用冷冻切片试试或多做几例阳性片。

闲云

冰冻都没有结果的话就可能是抗体自身问题了。