冷冻切片间接免疫荧光组织 实验步骤 讨论大家好，帮我看看这个 大鼠膀胱组织 冷冻切片的 间接免疫荧光 实验步骤有哪些问题~~~
实验步骤
- 将冰冻切片入4°丙酮内固定10分钟
晾干 - 用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗切片3X3min，再用0.1％Tritonx－100处理15min
- PBS漂洗切片，使切片保持一定湿度。
- 0.03%双氧水/甲醇 封闭内源性过氧化物酶20 min(25℃)
- 1% BSA室温孵育30min 后加入C-kit 单抗4℃过夜。
- 加C-kit 荧光标记2抗，以下步骤需避光操作。25℃,孵育60min。
PBS漂洗3X5min
取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。- 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度
大家帮我看看 这个实验步骤有些什么问题。。谢谢大家。。
我有2个问题：
1.大鼠膀胱组织是用丙醇固定 好还是用 多聚甲醛呢 ？
2.我想问7--8步骤之间如果 加个 0.01%伊文氏蓝衬染1-3min, 跟现在相比哪个好，该不该加？
