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免疫组化

免疫组化

做免疫组化片的组织固定用什么对免疫组化影响最小????
酒精?甲醛?

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中性甲醛固定液最好

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10%的甲醛固定

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10%中性缓冲福尔马林

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回复 4# 的帖子

如果单纯是做免疫组化,那用12%中性福尔马林比较好。

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引用:
原帖由 格言 于 2010-9-18 22:42 发表
如果单纯是做免疫组化,那用12%中性福尔马林比较好。
道理呢?

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各有各优缺点
常用固定液:固定剂品种很多,但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同,各有优缺点。
-醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)
-醇类(常用乙醇)
-其它 (丙酮)
(1) 醛类
*甲醛(福尔马林)应用最广
-原理:形成分子间的交联,影响蛋白构型而使之固定。
-优点:形态结构保存好,且穿透性强,组织收缩少。
-缺点:
*甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色;
*醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍;
*分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
-注意事项:
*缩短固定时间,降低固定温度(4C),为此组织块不宜过厚。
*改用中性缓冲福尔马林,以pH值7.2~7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10%甲醛固定液,减少固定液pH的变化。
*固定后充分水洗以减少分子间交联。
*切片在作免疫组化染色前,先经预处理使抗原再现(抗原修复)。

*戊二醛:
-穿透性强,微细结构保存好,但对抗原有一定影响,常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。
*多聚甲醛(常用4%):
-可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光染色。
*主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原,例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。
(2) 醇类
* 最常用的醇类固定剂是乙醇。
-其固定作用:使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。
-优点:穿透性强、抗原性保存好。
-缺点:
*脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。
*乙醇使蛋白变性的作用轻,固定后可再溶解;染色过程中,温育时间长,抗原可流失而减弱反应强度。
(3) 其它固定剂
*丙酮:
-对抗原性的保存好,但脱水性更强,较少 用于组织标本,但细胞爬片常用丙酮固定。
3、抗原修复——原因
*常规的石蜡切片标本均用甲醛固定,结果使得:
-抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇;
-蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。
*要求:在染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。
生气,是拿别人的错误来惩罚自己      踏踏实实做人,认认真真工作

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引用:
原帖由 6504339 于 2010-9-19 07:48 发表
各有各优缺点
常用固定液:固定剂品种很多,但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同,各有优缺点。
-醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)
-醇类(常用乙醇)
-其它 (丙酮)
(1) 醛类
*甲醛(福尔马林)应用 ...
是您自己写的? 还是丛书上抄下来的?

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回复6

在日常工作中由于10%福尔马林受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入水分的影响,浓度容易被降低致组织固定不足,而高浓度的福尔马林,降低了对组织的穿透性,形成周围固定好而中央固定不到的现象。所以可以适当的增加福尔马林的浓度。当然从规范角度出发,还是应该使用10%中性福尔马林。

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引用:
原帖由 格言 于 2010-9-19 21:26 发表
在日常工作中由于10%福尔马林受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入水分的影响,浓度容易被降低致组织固定不足,而高浓度的福尔马林,降低了对组织的穿透性,形成周围固定好而中央固定不到的现象。所以可以适 ...
好!
可以写一篇论文.

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