磷酸二氢钾、磷酸氢二钾配制的缓冲溶液不能代替PBS缓冲液用于病理实验
理解缓冲溶液:
缓冲溶液:能抵抗少量外来强酸、强碱而保持其pH值基本不变的溶液。
缓冲溶液一般由具有足够浓度、适当比例的共轭酸碱对的两种物质组成,组成缓冲溶液共轭酸碱对的两种物质合称为缓冲系或缓冲对。
磷酸二氢钠与磷酸氢二钠组成缓冲溶液,其缓冲对为:H2PO4-(弱酸) HPO42-(共轭碱),
质子转移平衡:H2PO-+H2OHPO42-+H3O+
仅仅从化学原理来考虑,使用磷酸二氢钾与磷酸氢二钾也可以配制出pH值为7.2的缓冲溶液。
但这种缓冲溶液不能替代PBS缓冲液使用在免疫组化及其他病理实验中,理由如下:
人体血浆中Na+浓度为144mmol/L,K+浓度为5mmol/L,
PBS溶液中的阳离子为Na+,用PBS缓冲液不仅仅考虑Ph值得稳定,还考虑了阳离子类型与浓度,尽量接近动物生理状态的内环境,使酶活性、抗体活性等等保持稳定。
如果用磷酸二氢钾与磷酸氢二钾配制缓冲液,pH值可以满足7.2的要求,但K+浓度过高,会在一定程度上影响抗体的活性与反应的稳定性。我们做的免疫组化、原位杂交、FISH等等实验,归根结底都是“生物有机化学反应”,反应体系的离子类型、离子浓度一定会对反应的效果造成影响。
以上仅为个人观点,希望能得到老师们的指正!
[ 本帖最后由 王华 于 2012-5-20 08:09 编辑 ]