janeh59

我的实验需要同时完成好几个部分，包括取系膜淋巴结，PP结，做流式及细胞培养，还有取肠道组织做病理，以及电镜，结肠内容物做粪便细菌培养，还有肠粘膜IgA测定，同时取材，我现在觉得不知道如何安排顺序比较合理，在这样的情况下如何保证病理切片取材不被破坏呢

folksmile

有无菌要求的第一，便便最后，其他就一起来吧，哈哈，其实如果3，5分钟一只，也无所谓先后了。

janeh59

谢谢folksmile鼎力相助
肠道组织做病理与肠粘膜IgA测定会不会冲突啊，听说肠粘膜IgA是要刮取肠道粘膜表面粘液来做的，那会破坏肠道粘膜结构吧，还有关于肠道病理取材的问题，我师兄跟我说剪下一段肠子来丢在福尔马林里就可以了，我做过一次，肠粘膜结构有破坏，后来据说是要先剖开肠道，背面贴上滤纸，冲洗干净然后再丢进福尔马林里，可是如果要贴上滤纸，我还怎么取PP结呢，可不可以先取完PP结，但是肠道要泡在PBS里面的，这样会破坏肠粘膜结构吗，而且这样就没有办法刮取肠道粘膜表面粘液了，那该怎么办呀
不知道上面的朋友可否留下联系方式，我可以电话或别的方式请教啊，实在是很心急啊

folksmile

别急，搞清几个问题先：1. 大鼠肠子长度是多少？2. 病理取材组织多大？没有道理整个肠子都要切吧？3. 集合淋巴结解剖位置？

janeh59

大鼠肠道我没量过，据估计有20－30cm左右，我取病理只需要两段（空肠回肠各一段），约1cm左右，PP结分散在整个小肠，大约2－5cm不等左右距离一个。所以关键是我不知道肠道泡在PBS中会否对肠道粘膜形态有损害，因为为了保持PP结中细胞的活性我可能需要肠道取下后马上泡在PBS中，还是我可以先将肠道铺在滤纸上取完病理后再将肠道放回PBS中，再取PP结，因为PP结一个个取很慢的，就算熟练也要大概15分钟取完。然后头疼的是取粘液，我看文献上说要取15cm左右的肠道，取粘膜表面刮取物，这样子如果破坏了肠道粘膜，就没多少可以取病理的了，而且取粘液也是说要铺在滤纸上用玻片刮，这样会损坏PP结内淋巴细胞的活性吗
真的很感激folksmile的耐心

folksmile

淋巴组织没培养过，你分离淋巴细胞培养吗？一般把PBS冻4度，取材后再放冰箱，隔一夜再培养都没事的；取粘液一定要用刮吗？刮完了小肠绒毛都刮平了，还做什么光镜电镜呀。看看粘液是用来干嘛的，如果稀释无所谓，就用洗脱的吧，感觉更合理一些，不然什么细胞碎片，血细胞，淋巴什么都有，只能做离心做酶学了。不知道说得对不对，你再查查文献吧。哈哈，又是周末！

janeh59

恩是啊可能粘液只能冲洗来做了，确实文献上也有冲洗来做的，是做ELISA，测IgA.那PP结应该可以先4度保存起来等取好材再磨吧，是吗，是用来做培养的，取上清
哎呀做点试验还真是不容易啊。太多细节不清楚了。
对了，关于肠道取材做病理切片的方法我说的对吗，是要用滤纸吗，可不可以给我个具体的protocol呀，就是取材的那个部分。
周末还要做试验！

folksmile

你说：福尔马林，肠粘膜结构有破坏，不知道有没分析是为什么破坏的呀？滤纸拿来干嘛？protocol可不知道了，你们师兄论文里没有嘛？

shanghainese

folksmile 是个好老师.
我要向 folksmile 学习,因为我太没有耐心了.

folksmile

谢谢！不过不敢当，我还要向您多多学习！