请教各位老师：坚牢蓝染色的方法和步骤
5um厚，烤干。
1．脱蜡水化至95％酒精
2．LFB（坚劳蓝）60度2-5小时瓶密封（新配时）或37度过夜最佳
3．95％酒精（冲洗，洗净）
4．蒸馏水洗。（流水冲洗干净）
5．0.05％碳酸锂溶液5秒。注意，使用后要经常更换。保持新鲜
6．70％酒精二次，
7．蒸馏水洗（流水冲洗干净）
8．显微镜下观察，重复5－7至白质和灰质有鲜明对比（重复3－4次）标准：核无色，髓鞘在浅灰/蓝色背景下呈绿宝石色。
9．70％酒精洗
10．0.5%伊红浸一下（新配）.乙醇性依红好（可不用）
11．蒸馏水洗
12．Cresyl violet(结晶紫)浸一下（新配）
13．70％酒精洗：标准：可见核和尼氏小体呈紫色，大约30秒
14．蒸馏水洗
15．脱水95％酒精1次，100％酒精2次（快）吹干二甲苯透明，封片。
16．结果：髓鞘 蓝色 尼氏小体和神经细胞 紫色 红细胞 宝蓝色
17．设备要求：清洗所有的玻璃器皿用单蒸水，密封盖，60度过夜
18．LFB溶液配制：LFB 1.0g+95%酒精100ml+10%冰醋酸5.0ml混匀，过滤，储存一年
19．0.05%碳酸锂配制：碳酸锂0.5g+双蒸水1000ml
20．水溶性依红:依红Y0.5g+双蒸水100ml,用玻棒搅起泡末后过滤，每100ml加冰醋酸1滴
21．乙醇性依红：依红Y0.5g+90％酒精100ml,用玻棒搅起泡末后过滤，每100ml加冰醋酸1滴，此种伊红染细胞浆后，分色快。
22．0.25%结晶紫配制：结晶紫0.25g+双蒸水100ml+10%冰醋酸1.0ml混匀，过滤，保存二年
23．小结：脊髓小染色好，脑组织大，染色要洗干净.LFB时间不能过长
