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求助:关于胚胎冰冻切片出现的问题

求助:关于胚胎冰冻切片出现的问题

我做低等生物胚胎发育的冷冻切片,胚胎较小直径约170微米,10%甲醛固定后,琼脂包埋,LEICA冰冻切片机-24

摄氏度,样品放置20min快速冷冻后切片厚10微米。结果发现圆形胚胎全部变形或破裂。


       有可能是温度低了点,样品冷冻时间长了点,但还没有尝试重新做。


       不知道各位有没有遇到过类似的情况,请求各位达人给予解决建议。


         不胜感激!!!

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你所说的那么小的胚胎我没做过冰冻,但我觉得大同小异,首先冰冻的是不是不该要固定的呢。其次,既然是胚胎,比较嫩,水比较多。我认为温度在  -16到-18比较合适。>-18容易动过头弄的脆,<-16的温度动的慢,水容易从胚胎中溢出使其变形。时间应该是看见冻住了就要切,组织太小很容易冻坏。

没弄过这么小的东西,这是个人想法。你的温度肯定太低了。
为人民服务

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谢谢LS版主建议,我的胚胎样品水分含量相当大。因为是水生动物的胚胎,这也给我的试

验带来很大的困难。样品用普通胶水固定的,应该没什么问题。不知道10微米是不是薄了点?

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温度太底是一方面,还有就是可能冻的时间太长了。
  一般水份比较大的组织  冷冻时间稍短一些

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谢谢LS各位提出的建议。

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是不该要固定的,估计形成冰晶了。
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切好后在固定,做HE可以考虑用丙酮固定。
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我的材料是从外地取回来的,不固定肯定是不行的,取材要好几天甚至是十几天,所以必须取了材料先固定,我做的是碱性磷酸酶染色。

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回复 1# 的帖子

如果你下次再做时,先用液氮速冻.

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