persev

我的样品10%甲醛固定后用普通琼脂包埋再常规脱水70%80%85%90%各30分钟，100%两次、酒精：二甲苯1：1、二甲苯均10分钟，二甲苯：石蜡1：1过40分钟，透蜡4小时。结果切片蜡带破裂，琼脂变的坚韧很难同石蜡一同被切下。
跪求各位大侠高人指点啊~~~急~~急~~~

淡若水

没有用过琼脂，所以不知道它有什么特点。不过，我觉得你的标本在石蜡里的时间似乎太长了点，另外也不知道，你石蜡的缸温是设的多少度？温度太高组织也容易变硬脆的。
另外如果蜡块开裂，是不是你包埋后，没有让蜡块完全凉透、凝固就放入冰水里，这也容易导致蜡块出现裂口的。
还有一种杂志上报道的让蜡块内硬脆组织软化的办法，我试用过，效果还可以。就是把蜡块修切到需要的切面后，让组织面浸泡在这种液体里十来分钟，再切。配方，应该在笔记本上，我去查一下。

淡若水

《诊断病理学杂志》07年P474,《关于组织切片裂隙的处理》
用5mmol/L的盐酸盐液溶液处理蜡块，我试过，用它处理变硬脆的甲状腺，效果还不错。你可以查一下原文，试一试。
其实这种我已经配制了的盐酸盐液，正好可以解决前两天我发的“怎么解决切片出现裂隙”的帖子，我没有仔细看。
不过，版主给我建议的脱水程序，我试了一下，蜡块确实也有改进。

persev

感谢淡若水对我帖的关注和对本试验的建议！我透蜡是放在那种老式挂俩灯泡的烤箱，温度大概在65摄氏度左右。包埋后是自然冷却的，结果切片不是裂开，而是蜡片中间是个大窟窿。我把琼脂块从蜡块上扣下来，发现琼脂块很硬。后来我试了延长脱水时间，结果琼脂块还是很硬，切成的蜡带还是中间一个窟窿一个窟窿的，不知道为什么。

淡若水

组织块变硬，一般有两种情况，一是，进入二甲苯和浸蜡阶段的温度和时间太长，另一个就是脱水没有脱干净了。
从你说的情况来看，好像还是属于脱水的问题。不知道你包埋的时候，有这样的窟窿没有？如果包埋的时候没有，而是搁置了半天，切片时才出现，那可能还是脱水没有脱干净。进入二甲苯前水如果没有脱干净，后面的石蜡是进不了组织内的。包埋后，暴露在空气里时间稍长，组织内水分蒸发了，蜡块自然收缩变硬，周围出现窟窿了。你试一试纯酒精的时间延长半个小时到一个小时看看，当然要看你整个琼脂块的大小，如果小，时间短点，如果大，就稍微长点。
另外就是，包埋的时候，要趁组织块的蜡还是熔融状态时包，如果开始凝固了，那包出来也有气泡的。
因为不知道你的具体情况，有点隔靴擦痒的感觉，仅供参考哦。