淡若水

切片有裂纹及灰染怎么办，我曾经想过很多办法都没有解决好这个问题，下面是我在网上看见的类似我的问题，敬请同行指教：

淡若水

最明显的是细胞丰富的宫内膜腺癌和这两张图片的结肠病变。我曾经想过很多办法：对裂纹,我采取过重新冷冻腊块，选用新的刀片，将切片厚度切的更薄，如4’，染色完成后,经过梯度酒精,再进入二甲苯,然后再加盖片,这些措施,可以使切片有点改善,但是还是没法根本解决问题。片子发灰的问题，我试过延长染色时间，和延长分化时间，效果也是收效甚微，殷切希望同道给予指点。

ChenRong

和固定与脱水有关，特别是脱水，最好调下。
你说的在冻和换新刀，当冻的太厉害了，用新刀很容易弄出这个情况来

淡若水

谢谢版主的指点。

淡若水

我的脱水透明浸蜡程序大概如下：

1.  80% 酒精          30分钟－6小时，
2.  90％酒精          30分钟－6小时，


（以下是进入自动脱水机）
3.  93％酒精             30分钟
4.  95％酒精             30分钟
5.  95％酒精             30分钟
6.  97％酒精             30分钟
7. 100％酒精            30分钟
8. 100％酒精            30分钟－12小时（有时需要过夜）
9.      二甲苯             30分钟
10.    二甲苯             30分钟
11.    二甲苯             30分钟
12.       石蜡（50－52度） 30分钟  （缸温 70度，以下同）
13.       石蜡（50－52度） 30分钟
14.       石蜡（60－62度） 30分钟

切片机是徕卡的轮转式切片机，刀片是用的徕卡的818.
因为标本量不算太大，大约每年1200例左右，所以试剂一般一周更换一次。一般组织基本还是比较满意，就是宫内膜癌和上面那种细胞丰富的消化道腺癌出现裂纹和片子发灰的情况，问题究竟出在那儿？请版主和其他同道提出宝贵意见

[ 本帖最后由 淡若水 于 2008-7-18 20:42 编辑 ]

镜子王朝

嗯。同意版主意见。裂纹主要是冻得太久。而且从脱水时间看，个人觉得高浓度长了点，组织本就有些硬了，再一久冻，就可能裂纹。
发灰，主要是固定问题。另外，可以检查一下苏木素。

[ 本帖最后由 镜子王朝 于 2008-7-18 22:49 编辑 ]

淡若水

切片前我的腊块只是放在冷藏室的冷水里，连冰块都没有。应该不存在过冻的问题，只是会不会冷冻不够？
       放入冷水前，我是让蜡块完全凝固了，才放在冷水里的，蜡块一般不会产生裂纹。
       因为怕脱水机过夜遇到打雷、停电或者其他机器故障，所以常常只走到纯酒精一步，就关机，第二天上班再开机，走完后面的程序。这样处理的结果，一般宫内膜和小组织，切片也没有什么异常。只有宫内膜癌和我下载的肠道细胞丰富的病变，才出现这样的情况。
      以后我遇到宫内膜癌的时候，再试一试，纯酒精不放长了，看单独脱水的效果怎样。
      至于片子发灰的问题，用同样的苏木素，其他组织又没有这样的现象。似乎也不好用苏木素解释。下面是一张甲状腺的片子，胞浆也没有这种现象啊。


[ 本帖最后由 淡若水 于 2008-7-19 12:06 编辑 ]

ChenRong

1.  80% 酒精          1小时，
2.  90％酒精          1小时，


（以下是进入自动脱水机）
3.  93％酒精             1小时
4.  95％酒精            1小时
5.  95％酒精             1小时
6.  97％酒精            1小时
7. 100％酒精            1小时
8. 100％酒精            1.5小时
9.      二甲苯             15分钟
10.    二甲苯             25分钟
11.    二甲苯             30分钟
12.       石蜡（58-60度） 1小时  （缸温 61度）
13.       石蜡（58-60度） 1小时（缸温 61度）
14.       石蜡（58-60度） 1小时 (缸温 61度)  
注：
1，你酒精的浓度没给你改，每人的用法不同，但不用精确到97%吧，没那么准。
2，蜡都用58-60的为好，第一道蜡进入了二甲苯很容易硬度下降
3，100%过夜不好，还是不要这样。
4，我给你改的时间是大小标本同脱水的时间，小标本（如胃镜），酒精都改10到20分钟就够了。但很多医院还达不到分开的条件。（同脱时容易过头的小东西用纱布包一包，让它不易脱水）
5，二甲苯如果是加温到35度时间控制在45-60分钟
6，脱水没有绝对的，还是要考自己慢慢摸索，我改的只是参考。

ChenRong

忘了，发灰还是固定的原因多点.

淡若水

谢谢版主，用心给我回了帖子。如果按照版主的意见，确实解决了我的问题。那倒是解决了我多年来的一个大难题。
酒精97％的浓度，是个大概，是利用纯酒精浓度不够后的再利用。前面的95％的酒精，我是用的工业酒精，这样成本可以降低。（会不会影响免疫组化，我不知道，但是似乎对HE片子没有影响）如果这一缸的浓度低于了95％，我就废弃不用了。因为杂志上有文章介绍，高浓度的酒精里溶有较多脂肪，如果浓度降低后，继续前移使用，会影响制片效果。