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请教各位老师:坚牢蓝染色的方法和步骤

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请教各位老师:坚牢蓝染色的方法和步骤

http://www.bris.ac.uk/Depts/PathAndMicro/CPL/lfbcv.html

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请教各位老师:坚牢蓝染色的方法和步骤

5um厚,烤干。
1.脱蜡水化至95%酒精
2.LFB(坚劳蓝)60度2-5小时瓶密封(新配时)或37度过夜最佳
3.95%酒精(冲洗,洗净)
4.蒸馏水洗。(流水冲洗干净)
5.0.05%碳酸锂溶液5秒。注意,使用后要经常更换。保持新鲜
6.70%酒精二次,
7.蒸馏水洗(流水冲洗干净)
8.显微镜下观察,重复5-7至白质和灰质有鲜明对比(重复3-4次)标准:核无色,髓鞘在浅灰/蓝色背景下呈绿宝石色。
9.70%酒精洗
10.0.5%伊红浸一下(新配).乙醇性依红好(可不用)
11.蒸馏水洗
12.Cresyl violet(结晶紫)浸一下(新配)
13.70%酒精洗:标准:可见核和尼氏小体呈紫色,大约30秒
14.蒸馏水洗
15.脱水95%酒精1次,100%酒精2次(快)吹干二甲苯透明,封片。
16.结果:髓鞘 蓝色     尼氏小体和神经细胞  紫色   红细胞  宝蓝色
17.设备要求:清洗所有的玻璃器皿用单蒸水,密封盖,60度过夜
18.LFB溶液配制:LFB 1.0g+95%酒精100ml+10%冰醋酸5.0ml混匀,过滤,储存一年
19.0.05%碳酸锂配制:碳酸锂0.5g+双蒸水1000ml
20.水溶性依红:依红Y0.5g+双蒸水100ml,用玻棒搅起泡末后过滤,每100ml加冰醋酸1滴
21.乙醇性依红:依红Y0.5g+90%酒精100ml,用玻棒搅起泡末后过滤,每100ml加冰醋酸1滴,此种伊红染细胞浆后,分色快。
22.0.25%结晶紫配制:结晶紫0.25g+双蒸水100ml+10%冰醋酸1.0ml混匀,过滤,保存二年
23.小结:脊髓小染色好,脑组织大,染色要洗干净.LFB时间不能过长

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