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干湿固定

干湿固定

最近研究TCT的制作
发现很多书上都是写制片后直接将玻片放入95%的酒精中固定 也就是湿固定 染色效果会比较好
也尝试做了几次
同一个标本做了两个片子 一个湿固定,一个晾干后再固定
染色后确实湿固定的片子效果会好一点
可是湿固定的片子很容易出现掉片
基本细胞没剩下多少

请问下,如果要湿固定,是不是要预先处理载玻片?
具体怎么操作呢?

PS:制片过程中有用滤膜,所以片子出来后基本是半干状态,没有太多水分,可是湿固定依然会出现掉片,现在基本都是晾干后再固定的

[ 本帖最后由 wyuer 于 2010-6-24 21:06 编辑 ]

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湿固定的片子很容易出现掉片,说明你的片子还太湿,水分太多。要把试管口水吸干,再吸出沉淀涂片。
液基制片,如果是胸腹水,没什么意义,细胞质量、数量形态也都没有离心法好,多少有退变。
湿固定不需要预先处理载玻片。
如果是液基细胞,玻片必须处理,否则会掉片。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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是用细胞涂片离心机做的TCT的片子
也就是通过高速离心将细胞均匀的贴附在玻片上
现在离心速度1000转/分
如果提高离心速度会不会提高细胞的贴附从而改善湿固定掉片情况?

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提高离心速度会提高细胞的贴附性,一般2000转/分,速度再高玻片容易断。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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谢谢丁老师~
我下周回去再试试~

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模式细胞制片,载玻片一定要特殊处理的,不然湿固定后肯定有很多细胞会脱落。手工涂片的话,当然用处理过的最好,没有的话也没关系,离心好涂片的时候尽量用吸管多吸中间层细胞,这层的细胞量相对比较密集,细胞相对来说还是有一定的粘附作用的。。。。。不知道我说的对不对,个人经验。。

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离心平衡是个问题啊,我们的一次最多放6张的,但只放一张时,平衡就有点问题了,放一个空的进去,肯定分量少点,转速我一般1400,太高噪音大,心里没底,老怕轴坏了,求教———!!!

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轴坏不了,就是片子会破
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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防脱片和保存液,这两者都非常重要,否则很容易掉片。湿固定不能用普通载玻片,必须要用防脱片,而也要好的防脱片,除此之外,保存液也不能与防脱片冲突。

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