colin

最近买了太阳生物的几种抗体IgG、IgM、IgA（工作液）用于标记肾小球肾炎的抗体复合物表达情况。
     修复方式：CBS+高温高压+胰酶修复
                      CBS+高温高压+胃蛋白酶修复
     后面按常规免疫步骤做。
     结果：肾小球肾炎标记未见阳性（组织病变本身应该是要表达其中一种的）
                扁桃体作阳性对照三种抗体均能表达（上述两种修复方式）
      请教：不知道有没有哪位前辈及同行在做这几种标记的，请问具体的修复方式及步骤。
     不甚感激！谢谢！谢谢！

shanghainese

当心一点，肾脏里有很高的内源性生物素。
您的抗IgG、IgM、IgA抗体 是抗人的还是抗鼠的？
如果这些抗体是多克隆抗体，可能不需要做抗原修复。

colin

引用:

原帖由 shanghainese 于 2010-8-12 12:17 发表
当心一点，肾脏里有很高的内源性生物素。
您的抗IgG、IgM、IgA抗体 是抗人的还是抗鼠的？
如果这些抗体是多克隆抗体，可能不需要做抗原修复。

全部抗体都是鼠抗人单克隆。
      对于内源性生物素的问题可否延长过氧化氢的阻断时间呢？
      谢谢！

shanghainese

引用:

原帖由 colin 于 2010-8-13 09:55 发表

      全部抗体都是鼠抗人单克隆。
      对于内源性生物素的问题可否延长过氧化氢的阻断时间呢？
      谢谢！

内源性生物素无法通过氧化氢来阻断。 不过您可以用生物素阻断试剂盒。
有人用蛋青，但是效果不一定好。

shanghainese

引用:

原帖由 colin 于 2010-8-13 09:55 发表

      全部抗体都是鼠抗人单克隆。
      对于内源性生物素的问题可否延长过氧化氢的阻断时间呢？
      谢谢！

另外，单克隆抗体不一定能够用在福尔马林固定的石蜡切片上。
您可以试在丙酮固定的冰冻切片上。

bl811713

你可以试一下用冰冻切片做，切好片子（用打胶片）后用丙酮固定10分钟，而后放在室温下10分钟防止脱片，PBS液冲洗3次，3分钟每次，而后滴加抗体，37度温箱孵育30分钟，PBS液冲洗3次，3分钟每次，完后用甘油和PBS一比一混合后封片。在荧光显微镜下观察。

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IgA不需要预处理，IgG、IgM热修复/胰蛋白酶

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主要对扁桃体，对肾小球肾炎进行功能性的分类。
有的时候看抗体的来源，如果是在扁桃体中培养出来，可能对肾小球不敏感，可以让太阳提供肾小球的质控片。