请教银染相关问题，急！
本人正在采用de olmos改良的铜银染法对神经溃变纤维进行染色，切片厚度为6um，并将切片贴附在载玻片，但是始终然不到溃变神经纤维，倒是出现好多正常的神经细胞，不知道为什么。是不是，切片太薄呢？请教大家能够解答一下，在下不胜感激！谢谢！
还有，我的切片前处理是这样的，多聚甲醛心内灌注，然后25%蔗糖脱水，冰冻切片，然后在-80℃冰柜中保存，然后取出烘干。接下来就是染色。
染色步骤：
1. 蒸馏水洗3分钟，擦干。洗5次。
2. 铜银溶液40℃浸泡1h，然后冷却至室温。过夜。取出，擦干载玻片。
3. 丙酮45秒
4. 氨银溶液浸泡30分钟，并在水平摇床下，轻轻摇动。取出，擦干载玻片。
5. 还原液（柠檬酸，10%甲醛溶液）浸泡1分钟。取出，擦干载玻片。
6. 0.3%铁氰化钾溶液中浸泡，10分钟。取出，擦干载玻片。
7. 蒸馏水洗1分钟。取出，擦干载玻片。连续洗三次。
8. 硫代硫酸钠溶液浸泡1分钟。取出，擦干载玻片。
9. 蒸馏水洗1分钟。取出，擦干载玻片。连续洗三次。
10. 明胶乙醇溶液浸泡5分钟。自然干燥，过夜。
11. 梯度乙醇处理，二甲苯透明，封固。
请问哪些是需要注意的地方?指点一下迷津。
[ 本帖最后由 daniel123 于 2010-9-27 17:30 编辑 ]
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