春晖

大鼠骨组织制作石蜡 切片时酒精梯度脱水，浸蜡的时间是如何掌握的？EDTA脱钙液何种浓度脱钙效果较好且省时，是如何配制的？

春晖

这是紧急求救，我也是第一次上论坛 ，请各位高手多多指教

shanghainese

春晖:
骨组织的石蜡切片的关键是脱钙，其他步骤没有什么特殊。脱钙的方法教科书(技术)里都有，也在网上找找。用EDTA脱钙对免疫组织化学和组织化学比较好，但速度慢。硝酸速度很快，容易过头，对组织损伤很大。第四军医大学口腔医学院病理科和上海第九医学口腔病理科用盐酸为主的复合液脱钙几十来效果很好。具体配方与适用方法请与他们联系。

武器

shanghainese 你好，我也想请教一下这个问题，如何与他们联系？
或者知道答案后能否告知一声？谢谢！

sissi123

脱钙可用EDTA或甲酸，如果楼主想要，给我发EMAIL！

忱忱

我知道华西医大病理科用的是:氯化铝(结晶)7克    37%盐酸 8.5毫升              甲酸(95%)     5毫升      蒸馏水       100毫升      骨髓一般4--5小时;骨组织一般24小时.效果挺好.

sissi123

脱钙方法总体分为：酸类脱钙法、螯合剂脱钙法、离子交换树脂脱钙法
1.酸类脱钙：
可用酸类单纯脱钙，也可用酸类混合脱钙。
前者以甲酸较好，一般骨用10%水溶液，一片3-4mm的松质骨，完全脱钙约需45小时，而密质骨需两周或更长的时间。最好每两天更换一次新液。有人认为50%的甲酸水溶液是目前最为理想的脱钙剂，脱钙迅速，一般2-3天，特别适用于标本块大或要求脱钙迅速时。而用盐酸或硝酸对组织损伤较大。
后者的配方较多，仅介绍一两个：
甲酸柠檬酸钠液：甲液：甲酸  25ml  蒸馏水  25ml
                乙液：柠檬酸钠  11g  蒸馏水  50ml
临用时将甲、乙两液等量混合，日换一次，因柠檬酸钠可螯合钙离子，故可促进脱钙。
plank-rycho氏液：盐酸  8.5ml  甲酸  5ml  氯化钙  7g  蒸馏水加至100ml
此液脱钙迅速，对染色无不良影响，一般数小时便可完成。
2.螯合剂脱钙技术
多用10%EDTA，对组织的损伤小，特别适合免疫组化。