永恒爱恋

在做免疫组化的时候背景的非特异性染色总是很深，加了3%过氧化氢封闭以后，还是有比较强的背景染色，主要是血管内皮和纤维母细胞，不知道封闭的时间该如何把握，到什么程度算是有效果，时间上如何调整，还有就是如果过氧化氢防止的时间过长或者长期与空气接触后在使用是否会影响封闭效果，病理小硕，请求专家解答，万分感谢！！

shanghainese

先要分析一下一抗。一抗的浓度是否恰当？一抗的特异性是否好？
内源性过氧化酶会产生背景染色， 但是其他因素也会产生背景染色。

永恒爱恋

一抗是多抗，第一次是按照它的推荐浓度稀释一百倍做的，第二次稀释150倍同时使用过氧化氢封闭，效果依旧不是很好，背景还是很深，是不是稀释的不够

shanghainese

引用:

原帖由 永恒爱恋 于 2011-11-22 18:09 发表
一抗是多抗，第一次是按照它的推荐浓度稀释一百倍做的，第二次稀释150倍同时使用过氧化氢封闭，效果依旧不是很好，背景还是很深，是不是稀释的不够

多稀释几个浓度。
要是还不行，退货换其他公司的产品。
不过您要仔细检查二抗的浓度是否恰当，Avidin-HRP, DAB是否有问题。

ChenRong

换个好点的过氧化氢试试。（过氧化氢也是有质量好坏的哦）

weiwei9757

13581556487

用鼠抗，单抗的试一试。