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请教肾穿荧光掉片问题

请教肾穿荧光掉片问题

最近两次做的肾穿荧光,总是存在肾小球掉出来或是不见了的情况,不知道有哪位老师可以帮忙分析一下原因~
步骤如下:
3微米冰冻切片,一张片上切2张组织,放入-24度冰箱冷冻1-2小时,取出,吹风机冷风吹5-10分钟,蒸馏水洗3次,每次3-5分钟,加抗体,室温过夜,蒸馏水洗3次,每次3-5分钟,荧光显微镜观察。
一直都是这样做的,以前没有这种情况,最近2次掉片挺严重的,每次都有重做的项目,谢谢各位了~

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