为什么CD133细胞核阳性
1、标本是乳腺癌组织白片
2、60℃考2小时。
3、二甲苯三缸Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、脱蜡,各10分钟。
4、无水乙醇两缸,各 2分钟;
5、95%酒精二缸,各 2分钟;
6、自来水流水冲洗2分钟;
7、PBS冲洗2分钟;
8、将已冲洗干净组织放入高压锅内,加入约2000ml左右柠檬酸盐的抗原修复液(pH6.0)盖好高压盖检查安全筏,沸腾喷气1.5分钟。
9、自然冷却移至蒸馏水中浸泡2分钟。
10、3%H2O2中浸泡10分钟,蒸馏水冲洗3min×3次。
11、取出切片,擦干组织周围的水,用免疫组化油笔画圈笔在组织块周围画一圆圈,
12、PBS缓冲液冲洗。
13、加一抗(CD133)孵育(PBS配制,1:100),将切片放入孵育湿盒中,4℃的恒冰箱中过夜。
14、用PBS洗3次,每次3分钟。
15、加二抗在组织上、放入37℃恒温箱中孵育30分钟。(兔/鼠通用二抗)
16、用PBS洗3次,每次3分钟。
17、DAB显色。
18、苏木素染液复染10分钟,
19、1%盐酸酒精分化3秒钟。
20、流水冲洗5-10分钟。
21、95%酒精二缸,各 2分钟 无水乙醇两缸,各 2分钟;
22、二甲苯I、II、Ⅲ,各2分钟23、中性树胶封片
结果:我自己觉得CD133是细胞核阳性。不知道是什么原因,帮我在分析一下
这是厂家第二次给我的抗体,第一是细胞核我以为是抗体原因。
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