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脑组织免疫组化求助

脑组织免疫组化求助

常规脱蜡至水,柠檬酸ph6.0微波修复高火7分钟 低火7分钟,一抗博奥森浓度1比100 ,4度过夜,37度复温1小时。二抗北京中衫37度17分钟(15分钟未见阳性),三抗37度15分钟。DAB北京中衫显色5分钟。
  片子上会出现很多片状假阳性斑点,求教是为什么!如何解决。谢谢!  每步骤后面都有pbs洗3次。

[ 本帖最后由 gutou 于 2014-1-6 12:01 编辑 ]
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做的什么指标?克隆号?

一抗孵育时间一般不需要那么长,37摄氏度40min。一抗稀释度也需要多次摸索。
二抗,孵育时间,15和17min的差别不可能这么明显,看是不是操作过程的问题,比如一抗干片?上抗体之前玻片不要甩太干了。在pbs中加入0.05%tween20,用阻水笔把组织圈起来。
这张片子采图很模糊,最好重新采。

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谢谢,我再试试,请问还有其他可能没有呢?! 我们怀疑和固定是否有关系,组织固定采用了灌注固定法!

[ 本帖最后由 gutou 于 2014-1-6 16:01 编辑 ]

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回复 3# 的帖子

你做的动物模型?
如果是,那就要看你的抗体选择是否正确

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看这架势应该是全片非特异的斑块样着色,先去好好检查检查抗体选对没,博奥深的一般是多克隆干粉,还是需要花点经历摸条件的。

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灌注固定30分钟后没有再次固定,也没有冲洗,直接冰箱里4度沉糖,是否是原因呢?

[ 本帖最后由 gutou 于 2014-1-8 18:53 编辑 ]

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回复 6# 的帖子

30分钟,太短了。。至少六小时。

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学习了

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