gutou

常规脱蜡至水，柠檬酸ph6.0微波修复高火7分钟 低火7分钟，一抗博奥森浓度1比100 ，4度过夜，37度复温1小时。二抗北京中衫37度17分钟（15分钟未见阳性），三抗37度15分钟。DAB北京中衫显色5分钟。
  片子上会出现很多片状假阳性斑点，求教是为什么！如何解决。谢谢！  每步骤后面都有pbs洗3次。

[ 本帖最后由 gutou 于 2014-1-6 12:01 编辑 ]

willfirm

一抗孵育时间一般不需要那么长，37摄氏度40min。一抗稀释度也需要多次摸索。
二抗，孵育时间，15和17min的差别不可能这么明显，看是不是操作过程的问题，比如一抗干片？上抗体之前玻片不要甩太干了。在pbs中加入0.05%tween20，用阻水笔把组织圈起来。
这张片子采图很模糊，最好重新采。

gutou

谢谢，我再试试，请问还有其他可能没有呢？！ 我们怀疑和固定是否有关系，组织固定采用了灌注固定法！

[ 本帖最后由 gutou 于 2014-1-6 16:01 编辑 ]

willfirm

你做的动物模型？
如果是，那就要看你的抗体选择是否正确

chenbing

看这架势应该是全片非特异的斑块样着色，先去好好检查检查抗体选对没，博奥深的一般是多克隆干粉，还是需要花点经历摸条件的。

gutou

灌注固定30分钟后没有再次固定，也没有冲洗，直接冰箱里4度沉糖，是否是原因呢？

[ 本帖最后由 gutou 于 2014-1-8 18:53 编辑 ]

willfirm

30分钟，太短了。。至少六小时。

yizhonghk

学习了