ＨＥ染色不良的常见问题与对策（一）
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一、切片脱蜡后出现大片白色的斑点
原因:由于烤(烘)片温度太低,玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干；切片在二甲苯停留时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。
对策:如果玻片是由于没有烤(烘) ,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分,然后重新用二甲苯脱去石蜡。如果烤(烘)干不足的现象比较严重,可能导致切片脱落,则无法补救。如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成,或使用的二甲苯过久,切片则需退回到二甲苯停留时间相对长些,或更换二甲苯,脱色、漂白、重新染色。
二、细胞核染色苍白、暗淡
原因:即苏木精染色太淡，此类问题可能有3个影响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木精染色液过度氧化,失去染色能力,不能再继续使用；分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗淡,则多数是由于脱钙过度造成。
对策:切片重新染色。如果组织在酸性固定液如Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长,细胞核染色能力将减弱,须增加其在苏木精染色液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善细胞核的着色。
三、细胞核过染
原因:即苏木精染色太深,甚至苏木精染液的分布占据了细胞质的位置。此类问题可能有3个影响因素,即切片在苏木精染色液停留过长、切片太厚、分化步骤时间太短。
对策:如果切片不是因为太厚(用显微镜仔细上下调节微调,只有一二层细胞核层次) ,脱色、漂白、重新染色,对于染色和分化时间做些适当的调整。如果确定是由于切片太厚导致的细胞核过染,则需要重新切片。
四、细胞核呈红、棕色改变
原因:主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。
对策:首先,每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力,发现氧化过度应及时更换。其次,可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氢钠等,在苏木精染色后,给切片以足够的蓝化时间。
五、伊红着色淡
原因:伊红染液的pH值可能大于5；也可能是蓝化液残留过多；切片太薄；或切片经伊红染色后在乙醇脱水时间过长。
对策:检查伊红染液的pH值,如果必要的话,用乙酸将其调节在416～510之间,从而使伊红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后,使用的弱碱性溶液被充分洗去,玻片上没有残留的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长,因为含水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。
六、细胞质过染、分色不足
原因:伊红染色液浓度太高,特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在；切片在伊红染色时间过长；切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快,而使乙醇分化伊红的作用不能产生。
对策:适当稀释伊红染色液,减少伊红染色时间,或者使切片在乙醇脱水等步骤时,停留时间相对均匀。同样,也要检查切片的厚度是否合适。
七、切片中出现蓝黑色沉淀物
原因:苏木精染色液中的金属膜,黏附在玻片上。
对策:每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液,如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。
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