请教氯醋酸酯酶(CAE)的染色步骤?
CAE染色步骤
一、试剂配制:
1.A液:萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中。
2.4%副品红液:取盐酸副品红(EM级)1g,溶于蒸馏水20ml内,再加入10m1/L的HCl 5m1,稍加温以增加溶解度,过滤、贮室温下。于使用前,取等量副品红液与新鲜的4%亚硝酸钠混合,之后用淀粉碘化物试纸测试,瞬间试纸应变为蓝色才合格,如果不变色,应加入更多的亚硝酸盐。
3.B液:o.1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml,加入新配制的副品红液3滴,用1moI/L HCl使PH值调至6.3。
二、染色步骤:
1.将A.、B二液混合,过滤,加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.
2.切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)
3.流水冲洗。
4.苏木素复染。
5.空气干燥后封固。