好好

shanghainese老师好！
  你所指的游离的冰冻切片是否指未经灌流固定过的新鲜冰冻切片？
  我开始时是做8微米的新冰冻切片（未经灌流等），后来看到有些文献上是20微米的，所以又做了20的（经过灌流、固定、脱水）了。可是发现片子不如8微米的好看，而且用苏木素复染后，分化时间又不对了，我实在有些弄不懂了？？？是厚度的原因？还是固定脱水的影响？
  望答复！

shanghainese

游离的冰冻切片在神经研究领域是指经灌注固定后的冰冻切片，这种切片通常为大鼠
或小鼠的脑组织，厚度在20至40微米，切好后的片子放在PBS里待用。这种切片的制
作比较麻烦特别是灌注，切片和染色，它们的步骤与一般冰冻切片不同而且不用任
何复染。整个染色过程中，切片始终处於游离状态。染完后才将切片裱在载玻片上。
您要想达到文献上的效果还是按文献步骤去做。另外您应该请个专家指导您的实验，
用同一种抗体用在不同的切片上，效果可能不一样。

好好

shanghainese  老师好！
  您给我上了很好的一课，我的导师学生太多，所做的课题涉及领域太广了，在病理技术方面他无法指导我，我一直是自己摸索加到处请教。
  就您的指导，我得出2条结论：1、20-40微米的脑片应该做漂片（游离的冰冻切片），最好请个专家指导。2、5-8微米的脑片可以做贴片（直接裱在载玻片上），可按常规染色。
  是吗？

shanghainese

对。
您应做出决定选择何种切片，以便将来总结结果写文章。
您还要明确了解您所用的抗体可以做组化。有些抗体虽然厂商说可用组化，但实际并非如此特别是二道贩子卖的东西(有的抗体特异性不对，有的Background很高)。

好好

谢谢您的指导！谢谢！