盐酸在免疫组化染色中的应用
盐酸在免疫组化染色中的应用
黄小萍 刘俊斌 广东省潮州市中心医院病理科
免疫组化染色已成为临床病理诊断的重要手段之一，由于在常规制片过程中，常因组织标本经甲醛固定后，抗原被封闭，使染色效果不理想。目前，国内外报道多采用微波辐射、高压加热等方法来修复组织抗原，而应用盐酸水解的方法则较少报道，作者应用盐酸水解法来修复组织抗原，获得满意效果，介绍如下。
1 材料和方法
1．1 材料 本院手术送检的食管、胃、肠、乳腺、卵巢等肿瘤组织。均经4％甲醛固定、石蜡包埋，连续4微米厚切片，60℃恒温箱烤片l一24h。载玻片先用多聚赖氨酸处理。
1．2 试剂 l moL·L-1盐酸水解液(配制方法：8.15盐酸十蒸馏水100m1)，0．0 l moL·L-1PBS
(pH7．4)缓冲液，即用型S—P法染色试剂盒。免疫组化试剂及缓冲液均购自福州迈新生物技术开发公司。
1．3 方法 (1)切片分实验组和对照组二组，均经二甲苯脱蜡，95％乙醇及蒸馏水各洗2次。实验组用l moL·L-1盐酸水解液处理，对照组不处理。(2)将实验组切片置于加满l moL·L-1盐酸水解液的立式玻璃染色缸中。放入60℃恒温箱内水解8-13min。(3)取出染色缸，切片在染色缸内冷却至室温。(4)取出切片，用蒸馏水洗2次。(5)将实验组和对照组切片同时按常规免疫组化染色S—P法进行染色，一抗4℃过夜，DAB显色3一10 min，苏木精复染，脱水、透明、封固。
1．4 判断标准 按其着色有无及强弱程度划分为：
阴性(-)；弱阳性(+)；阳性(++)；强阳性(+++)。
2 结果
与常规S—P法比较(表1)，在同一条件下，经盐酸水溶液水解后的组织，阳性反应着色深，呈明显的棕褐色，阳性强度有不同程度的提高，切片背景极清晰，无交叉反应及非特异性着色，染色效果优于常规方法。常规S—P法免疫组化阴性切片，经盐酸水解后，有部分出现阳性。
表1 盐酸水解法与常规法免疫组化标记结果
抗体
EMA AFP NSE LCA Vim P-糖蛋白 ER PR
盐酸水解法 + + + ~ ++ ++ ++ ++ ~ +++ ++ ~ +++ +++
常 规 法 - - + + + ~ ++ ++ + ++
免疫组化染色的成败，很大程度取决于组织内抗原的保存及暴露。其影响因素主要有：(1)在石蜡制片中，固定液中甲醛的醛基与坑原蛋白质中的氨基交联或抗原结构发生异常改变和出现空间障碍，掩盖了抗原决定簇，使抗原的反应性降低或完全消失。(2)制片过程中的温度、pH值等理化因素对抗原性有不同程度的影响。本实验采用l moL·L-1盐酸水解液，在一定条件下对组织进行处理。由于盐酸水解能使交联断裂，形成许多钛链和小分子多肽，暴露因交联而掩盖的抗原决定簇，使变性抗原复性。酸溶解了因理化因素引起变性的抗原易被洗脱。从而增强了免疫反应的特异性，提高阳性率，降低了背景色，获得组化染色的最佳效果。本方法的技术关键是要严格掌握好试剂的浓度、温度和时间。我们曾试用不同浓度、温度和时间对组织进行水解，均未能达到理想效果。说明一定条件下的试剂浓度、温度和时间对抗原的修复起着决定性的作用。
本方法操作简单，水解时间短，作用强，易于掌握。试剂来源方便、经济，水解液可多次使用。不需用微波仪、高压锅等特殊仪器，值得推广应用。
摘自：临床与实验病理学杂志 1999年10月第15卷第5 期 463页
