sally

我做了试验才回来,谢谢大家的指点!我发现你们都生活很规律哦,没有人熬夜,所以一早上这么多的回言,我很感激!
今天发现,阴性对照片很不错(反蓝),阳性组织很差,几乎全是一片棕色,当然预期该出现棕色的部位就深一些,颗粒状也比较明显,就是背景颜色太深了!我自己分析有几个原因,看看各位老师意见如何?
1:该大鼠肝脏是我的同学作的动物部分试验,我做检测部似乎他配的甲醛配方不对,稀了,我听他说后就指出纠正,但是已经固定3天了.
2,肝组织内的细胞很多空泡状改变,没有层次感,模模糊糊的一大片,感到标本很不好,会不会抗原扩散?
3,如果说是非特异性背景着色,以下原因:
1)我冲洗干净了,可以肯定
2)试验中切片没有干燥,保持了湿润
3)过氧化氢孵育了15分钟,
4)血清蛋白封闭也有10-20分钟(后来我做的是20分钟
5)组织抗原弥散?和固定液有关?
光镜下组织很模糊,去病理科作包埋的时候我就发现有一些组织是暗红色的,而正常的应该是黄色,对吗?
究竟问题是什么?我真的很迷茫,这种情况下非常苦恼,反看第一次记录(我做了4次了)那是用0.1%盐酸分化的，倒也蓝一些，后来换用了0.%盐酸酒精，反而不行了
最后请问老师们，分化的作用是什么？
我的邮箱：suolala@sohu.com,谢谢各位不吝指教！要是能电话请教就好了！
3)

dingwei

分化只是把细胞浆内的苏木素去除，还有核染太深了褪到合适的深度，你如果不是染的太深，根本没有必要分化。你说的原因和分化关系不大。鼠标本免疫组化不好做，常常会有一片黄的现象。固定液最好自己配，可用多聚甲醛。固定12-24小时立即脱水。

sally

((究竟问题是什么?我真的很迷茫,这种情况下非常苦恼,反看第一次记录(我做了4次了)那是用0.1%盐酸分化的，倒也蓝一些，后来换用了0.%盐酸酒精，反而不行))      谢谢老师,从这一句话,以及您所说的分化的概念,我想我没有必要分化,这就是为什么第一次用0.1%盐酸分化时还有一点蓝色，而现在是一片黄。
上次我的实验大鼠固定了3个月才做的包埋，用的是10％甲醛，但是效果不错。那是在资深老师指导下做的，现在是单腔匹马自己做。
听了您的意见，我感到很有收益。。现在我又想去做实验了，把分化这一步去掉！
还有疑问：
1。颜色太皇和什么有关？是不是DAB染色太深？我在镜下观察边的变皇才去洗的，是不是有一点棕色就洗？
2。肝细胞很多空泡状改变是什么原因？是肝纤维化的肝脏呢
谢谢

dingwei

1、背景颜色太深，可用梯度法再降低稀释比。
2、DAB量是不是正确，双氧水量是不是正确。配好后液体黄吗？
3、肝细胞很多空泡没见过片子，不好说。

sally

DAB是对的，我反复看了很多遍说明书了！850微升水，DAB各一滴，淡淡的棕色
降低一抗的化，想要的着色就会很浅了
丁老师，我盼您的回答很久了，谢谢

sally

今天按照丁老师说的作了一次，我没有分化，结果蓝色很美，谢谢

sally

还有阿，丁老师，苏木素在细胞浆是什么样色？如果是棕色的化，没有分化是不是棕色一些？