娟子

请教：我做的免疫组化背景非常高，请问有什么办法可以把消除背景染色呢？有人会在PBS中加吐温-20，不知道是什么作用?

Dingwei

用的是什么一抗和二抗，稀释比。及详细操作方法。

娟子

我做了几种一抗，背景都很深。具体有小鼠单克隆抗体PCNA、CD34、PKC等，稀释倍数都是100倍；二抗是生物素化兔抗小鼠。步骤如下：脱蜡至水，0.01M PBS冲洗三次至PH6.0 0.01M枸橼酸盐缓冲液配置的0.01%曲拉通X-100中浸泡10分钟－0.9%双氧水室温15分钟－0.01M PBS冲洗三次（每次５分钟）－枸橼酸盐缓冲液微波修复１５分钟－冲洗三次－封闭（正常山羊血清）１５分钟－一抗３７度两小时－冲洗三次－二抗３７度５０分钟－冲洗三次－高敏ＡＢＣ过氧化酶复合物３７度５０分钟－冲洗三次－ＤＡＢ显色至显微镜下出现阳性细胞为止，约１５分钟。
请问该如何改进上述步骤才能消除高背景呢？

fangdang

你好象是在做细胞组化。如果是就不要修复。

suede

三步伐抗原孵育的时间是不是太长了啊？