豆豆

我想问一下ABC法染色中，正常血清封闭的目的是什么？

dingwei

封闭非特异性抗原。

yang2000

如果用非免疫正常血清封闭效果不好,可以在血清中加0.25%的白蛋白.

豆豆

我在做免疫组化时分别做了封闭与不封闭的对照，但是其结果没有什么差别，所以我在怀疑封闭的必要性？
另外，我做免疫组化是用来检测抗体特异性的，在此之前我也从来没有做过修复，可是我了解到一般医院病理科在做组化是都是做修复的，这段时间我也做了几次修复并做了对照，可是从结果看来，好象也没什么差别，我搞不清楚这是为什么？从结果看来，修复到底有多大作用？ :em21:

DINGWEI

说的好，封闭与不封闭本无多大区别，如做二步法更没区别。不过血清我还是加，目的不在封闭，而在于加了血清后片子不容易干，加一抗时也方便，有个印子在，好加，滴上去就会自动盖满组织，也省一抗。致于修复，更是一个误区，你看说明书很少有抗体需要高温修复，有的要酶修复，有的不必修复，很多抗体修复与不修复没什么区别，有的修复了就做不出来了，也有的修复了阳性增加，又有谁能保证不是假阳性，所以我认为最科学的办法还是按说明书的要求去做，因为这是为此抗体特定的。

fal

[这个贴子最后由DINGWEI在 2002/12/10 10:02pm 编辑]

有时过氧化氢也可省。

tlzhou

血清封闭的目的是为了减少非特异性吸附，同种血清封闭是饱和组织对IgG的物理吸附。至于封闭前后差异不明显，有时抗体稀释液，二抗工作液中含有BSA封闭住绝大部分位点。但实验中必须要做封闭，这是对实验结果的保证。因为免疫组化本身存在缺点必须补救，你的结果才是可信的。

zgp

请教！小老鼠组织做免疫组化如何用检测试剂？