刘正国

丁伟，新年好！有个问题请教，我给一个博士做大白鼠脑组织细胞凋亡，使用的是宝林曼试剂盒，但结果不满意，所有细胞全部阳性，有什么办法解决？请赐教。

小率

看一下此试剂盒是用于人还是大白鼠。有时用于人的试剂盒在大白鼠组织上往往做不好。

临风揽月

不知道是碱磷酶还是过氧化物酶？如是后者就是阳性率高！当然是假阳性

刘正国

人和动物通用。

冰雪

刘老师：不知你是做石蜡还是冰冻切片？若是过氧化物酶标记，我认为减少非凋亡细胞的强染色应从几个方面考虑：
1.做石蜡切片固定剂，应4%多聚甲醛溶液（溶于pH7.4PBS中）固定，固定后应24小时流水冲洗，最好低温蜡包埋
2.阻断溶液：0.3%H2O2甲醇溶液
3.蛋白酶K消化时间不应太长
4.转化剂-POD应用100mM Tris-HCI，150Mm NaCl pH7.5以1：2—1：5稀释。
5.增加冲洗次数
6.DAB最好自己配置，最终浓度0.025%，显色时间可延长。
以上只是本人小建议，不知对你是否有帮助。

刘正国

谢谢！帮助太大了，明天我就试试，我认为稀释POD非常重要。