verysale

我在用一个抗体做免疫组化时，有一个奇怪的现象：在用DAB显色时可以看很明显的胞浆阳性，但是在苏木素复染并脱水透明封片后，原有的阳性信号全部消失了。首先申明，技术绝对过关，不存在三抗未洗干净而引起DAB着色的现象。且已经过二人以上重复用该抗体进行实验，都出现的相同的现象，请问各位，能否帮我分析一下原因，郁闷。
文字 :em16:

雪蕾

可能的原因之一是DAB信号太弱，可能仅仅是非特异信号。
原因之二是苏木素复染太强。
不知您的阴性和阳性对照如何？最好将您的照片传上来让大家看看。

verysale

在显色时，我们看到的定位是非常好的，就是仅在肿瘤组织的胞浆阳性，而其它间质组织以及正常的腺泡都是阴性的，复染的时间是15分钟，我们也考虑到是复染的问题，将复染时间有所缩短。空白对照阴性，无阳性对照。复染前的片子没有办法照相。复染后的片子，如果有机会能传上来就传上来，但我们这儿上网很慢，估计传上来很麻烦，：（

雪蕾

不知您用的是何种苏木素？解释过没有？复染只要淡淡地染一下核就可以了。推荐用Gill's 苏木素，一到二分钟就行了，不需分化。其配方有许多人在这里贴出来过。希望您能试试。

verysale

对不起，有个小错误，复染是四分钟，分化3秒，反蓝才是15分钟，谢谢雪老师

临风揽月

苏木素过染所造成的！试试把以前的片子再分化一下，镜下控制，多试试不同的时间，是否会有不同结果！