[求助]石蜡切片神经纤维的染色方法
Bielschowsky method
试剂配制:
1、 氨银乙醇液
20%硝酸银水溶液30ml中加入20ml无水乙醇,混合;加氨水,出现沉淀后继续加氨水直至沉淀完全溶解;继续加氨水1-2ml;过滤三次(器材必须非常清洁);置于棕色瓶中避光保存。
2、 5%硫代硫酸钠固定液
5g硫代硫酸钠,溶于100ml双蒸水中,避光保存。
实验步骤
1、 将已在37度恒温箱中的切片,二甲苯-70%脱蜡及脱水。
2、 双蒸水清洗三次。
3、 2-4%硝酸银水溶液中37度避光浸银30min。
4、 倾去硝酸银水溶液,双蒸水清洗三次。
5、 10%甲醛水溶液还原5min至切片呈微黄色。
6、 双蒸水清洗三次。
7、 擦干切片背面及组织周围水分,一次5片置于湿盒中。
8、 滴加氨银乙醇液5分钟,每片200ul。
9、 擦去组织周围及背面氨银液。
10、8%甲醛水溶液中浸泡,注意转动切片,到黄色不再加深。
11、蒸馏水清洗三次。
12、 重复7、8、9、10步骤2-3次,直到显微镜下可清晰观察到斑块为止。如染色过浅可继续重复;染色过重可用冰醋酸褪色。
13、蒸馏水清洗5min。
14、脱水及透明,封片。